實時定量RT-PCR檢測急性早幼粒細(xì)胞白血病PML-RARα融合基因及臨床分析.pdf

1、目的：建立RQ-PCR檢測PML-RARα轉(zhuǎn)錄本方法學(xué)。檢測10例初治APL患者及23例緩解期APL患者的PML-RARα融合基因,探討其臨床意義。
　　 方法：根據(jù)文獻(xiàn)設(shè)計PML-RARα融合基因三種異構(gòu)體及ABL內(nèi)參基因的引物和探針,提取PML-RARα融合基因L-型、S-型及ABL內(nèi)參基因轉(zhuǎn)錄本的陽性標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒,將其進(jìn)行10倍比的濃度梯度稀釋,建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,檢測TaqMan實時定量PCR方法的敏感性、可信性、特異性,最終定

2、量結(jié)果用NQ值表示。用TaqMan實時定量PCR方法,對10例初治APL患者及23例緩解期APL患者的PML-RARα融合基因表達(dá)水平進(jìn)行檢測,并分析其臨床意義。
　　 結(jié)果:1.建立了PML-RARα融合基因異構(gòu)體L-型、S-型和內(nèi)參基因ABL的標(biāo)準(zhǔn)曲線。每條標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)R2均大于0.99,敏感度達(dá)10-5(1個APL細(xì)胞/105正常細(xì)胞)。2.日內(nèi)差變異系數(shù)CV(標(biāo)準(zhǔn)差/平均數(shù))為1.5％。日間差變異系數(shù)CV(標(biāo)準(zhǔn)差/

3、平均數(shù))為2.1％。3.10例初治.APL患者L-型和S-型、V-型PML-RARα融合基因轉(zhuǎn)錄本類型所占比例分別為60％、40％及零。L-型和S-型病人融合基因轉(zhuǎn)錄本NQ值分別為0.4741,0.5731,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。4.比較初治時6例L-型4例S-型APL患者的外周血WBC分別為(0.41-59.6)×109 mmol/1、(1.3-97)×109 mmol/1,(P=0.041)。而兩種基因型在性別、年齡、外周血紅蛋白、血小

4、板、骨髓幼稚細(xì)胞占有核細(xì)胞比例方面比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。5.在23例經(jīng)治.APL患者中,3年以上生存者9例,融合基因表達(dá)率占11.1％。3年以內(nèi)(含3年)生存者14例,融合基因表達(dá)率占50％。3年以上生存者融合表達(dá)、APL的復(fù)發(fā)、死亡率均低于3年內(nèi)組。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理,兩組間無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)論:1.建立了敏感性高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定可靠的檢測APL患者PML-RARα融合基因的RQ-PCR方法。2.L-型和S-型病人融合基因