中藥巴戟天抗骨質(zhì)疏松活性研究.pdf

1、骨質(zhì)疏松癥是一種以全身性骨量減少及骨組織顯微結(jié)構(gòu)改變?yōu)樘卣?并引起骨的脆性增加和骨的強度降低的疾病。它是老年人,尤其是絕經(jīng)后婦女最常見而又最容易被忽視的代謝性骨病。已有研究證明,骨質(zhì)疏松癥在白人及亞洲人群中發(fā)病率高。據(jù)保守估計,該人群中骨質(zhì)疏松患病總風(fēng)險性為39.3％。比乳腺癌和心血管病的危險性還高。隨著我國人口老齡化進程的加快,該癥的患病人群正日益龐大。我國北京、天津、上海和湖南的調(diào)查表明,50歲以上人群中20％的有骨質(zhì)疏松,其中以絕

2、經(jīng)后婦女尤為嚴(yán)重。因而探討其發(fā)病特點和防治對策具有十分重要的意義。 傳統(tǒng)中醫(yī)理論認(rèn)為：“腎主骨,腎虛則骨萎”,補腎中藥已被廣泛用于治療骨質(zhì)疏松,而且近年來補。腎中藥的治療作用同骨質(zhì)疏松的聯(lián)系成為目前中醫(yī)藥學(xué)研究的熱點,所以傳統(tǒng)補腎壯陽中藥巴戟天得到我們的關(guān)注。 巴戟天(Morinda officnalis How)為茜草科(Rubitaceae)多年生攀緣木質(zhì)藤本植物,屬亞熱帶雨林植物,為四大南藥之一。肉質(zhì)根供藥用,具有

3、補腎陽,強筋骨,祛風(fēng)濕的作用。巴戟天始載于《神農(nóng)草經(jīng)》,列為上品,歷代本草都有記載。巴戟天在中醫(yī)藥處方中應(yīng)用廣泛,是重要的中藥材品種之一。 (1)我們應(yīng)用去卵巢所致大鼠骨質(zhì)疏松癥模型,從整體動物模型角度對巴戟天總提物的抗骨質(zhì)疏松作用進行研究,通過測定大鼠脛骨骨礦含量(BMC)和骨密度(BMD),血清無機磷(P)、鈣(Ca)、肌酐(Cr)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、堿性磷酸酶(ALP)、脫氧吡啶諾林(DPD)、護骨素(OPG

4、)、白介素-6(IL-6),腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)、皮質(zhì)酮(Corticosterone)等指標(biāo),重點考察巴戟天是否能改善去卵巢大鼠的骨質(zhì)疏松狀況,進一步探討巴戟天補腎壯骨的作用機制。結(jié)果發(fā)現(xiàn),給服巴戟天提取物的去卵巢大鼠的骨損失能夠得到明顯抑制,同時不影響體重和子宮的變化。巴戟天提取物的抗骨質(zhì)疏松活性可能與增加血清P,Ca,OPG水平和抑制血清DPD/Cr,TRAP,ACTH水平有關(guān)。 (

5、2)我們還從整體動物模型角度深入探討了巴戟天總提物抗骨質(zhì)疏松作用的機制：因為根據(jù)報道巴戟天中葸醌類、甾體類、黃酮類化合物為主要成分,從結(jié)構(gòu)上都類似于植物雌激素類物質(zhì),而體內(nèi)雌技術(shù)激素水平的降低是絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松發(fā)生的主要原因。為了明確這些成分在口服給藥途徑上是否通過雌激素受體途徑發(fā)揮其抗骨質(zhì)疏松的作用,我們用ICR小鼠去卵巢來培養(yǎng)經(jīng)典的骨質(zhì)疏松動物模型。然后將濃度為0.075mg/ml、0.15mg/ml和0.3mg/ml的巴戟天提取物溶

6、液灌胃,每周6次。0.16mg/ml的尼爾雌醇為陽性對照藥,每周1次。4周后取血清,觀察子宮病理切片。綜合觀察巴戟天提取物對去卵巢性大鼠骨質(zhì)疏松癥的預(yù)防和治療,從表象上來看巴戟天具有植物雌激素樣作用的活性相關(guān)。 (3)通過檢測巴戟天5個不同部位(總提物、二氯甲烷部位、正丁醇部位、乙酸乙酯部位和石油醚部位)提取物對成骨樣細胞UMR-106增殖和堿性磷酸酶活性的影響,從細胞水平篩選出巴戟天的活性部位為總提物、二氯甲烷部位、正丁醇部位

7、和石油醚部位,都能顯著促進成骨細胞增殖和ALP的活性,有明顯的抗骨質(zhì)疏松作用。以上研究既是我們進一步把巴戟天開發(fā)為抗骨質(zhì)疏松藥具的必要前提,也給我們今后的巴戟天抗骨質(zhì)疏松的機制研究提供了可靠的細胞水平的依據(jù)。 (4)細胞水平上的研究主要上是針對石油醚部位對成骨細胞的作用機制探討：我們利用GC-MS技術(shù)從巴戟天石油醚部位檢測鑒定出25個化合物,其中蒽醌類和香豆素類化合物占百分比最大:hexadecanoic acid占20.93％

8、,ethyl hexadecanoate占7.07％,methoxsalen,8-Methoxypsoralen占0.24％,octadeca-9,12-dienoic acid占5.0％,(Z)-octadec-9-enoic acid占10.00％,7-methoxy-8-(3-methylbut-2-enyl)chromen-2-one占41.41％,ethyl octadecarloate占1.48％,2-hydroxy-1-m

9、ethoxy-anthracene-9,10-dione占2.88％。蒽醌類和香豆素類化合物都類似于植物雌激素,因此我們在MCF-7細胞(人胸腺癌細胞)中通過E-SCREEN法(公認(rèn)的檢測雌激素路徑法)來檢測石油醚部位提取物抗骨質(zhì)疏松的雌激素路徑。結(jié)果發(fā)現(xiàn)石油醚部位提取物0.03～300 mg/ml濃度都可以顯著刺激MCF-7細胞的增殖,其中3 mg/ml濃度的增殖作用與1nM的雌二醇作用最接近、最顯著；而且3 mg/ml濃度的石油醚部