利用OPG基因剔除小鼠模型研究抗骨質(zhì)疏松癥中藥的作用及機制.pdf

1、第一部分利用卵巢切除小鼠模型研究抗骨質(zhì)疏松癥中藥的作用及機制
　　目的：利用卵巢切除骨質(zhì)疏松癥小鼠模型，以阿侖膦酸鈉（福善美）為陽性對照，研究中藥仙靈骨葆抗骨質(zhì)疏松癥的作用及機制。
　　方法：40只2月齡129SV品系雌性小鼠隨機分為四組：卵巢假切+安慰劑組(SHAM+NS，0.2 ml*d-1)；卵巢切除+安慰劑組(OVX+NS，0.2 ml*d-1),卵巢切除+阿侖膦酸鈉組(OVX+ALEN，0.2 m h d—1)，卵

2、巢切除+仙靈骨葆組(OVX+XLGB，500 mg*kg-1*d-1),分別治療8周和12周后處死取材，應(yīng)用Micro-CT檢測小鼠骨密度(BMD)和骨小梁結(jié)構(gòu)、組織病理切片觀察骨形態(tài)變化、三點彎曲試驗和壓縮試驗檢測小鼠股骨和腰椎骨生物力學(xué)指標。ELISA方法測定血清雌二醇含量及OPG和RANKL蛋白表達水平。Real-time PCR方法檢測脛骨OPG和RANKL mRNA的表達水平。
　　結(jié)果：Micro-CT檢測股骨B M

3、D，喂藥8周時，OVX+NS組BMD(574.0±21.7 mg/cm2)低于SHAM+NS組8％(622.7±13.7 mg/cm2)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01)，與OVX+NS組相比，OVX+ALEN組（609.8土28.2 mg/cm2)提高6%（P<0.05)，OVX+XLGB組（597.9±27.2 mg/cm2)提高了4%(P>0.05)。喂藥至12周，OVX+NS組BMD(498.6±13.0mg/cm2)較SHAM

4、+NS組(636.5±12.4 mg/cm2)下降22%(P<0.01),與OVX+NS組相比較，OVX+ALEN組BMD(610.6±13.9 mg/cm2)提高了22%(P<0.05)，OVX+XLGB組(561.0土18.6 mg/cm2)提高了13%(P<0.05)。隨著治療時間的不同，OVX+NS組股骨和腰椎骨小梁結(jié)構(gòu)及骨生物力學(xué)指標均顯著低于SHAM+NS組(P<0.05)。給予仙靈骨葆和阿侖膦酸鈉治療12周后，骨小梁結(jié)構(gòu)顯

5、著改善（P<0.05)，骨生物力學(xué)指標顯著提高（P<0.05)。血清和脛骨OPG和RANKL蛋白水平與OVX+NS組相比明顯增高(P<0.05)，但不增加血清雌二醇水平（P>0.05)。
　　結(jié)論：仙靈骨葆能夠顯著提高卵巢切除小鼠的骨密度，改善骨微結(jié)構(gòu)破壞，提高骨生物力學(xué)參數(shù)且能夠上調(diào)血清和骨組織骨保護素(Osteoprotegerin，OPG)的表達水平。
　　第二部分利用OPG基因剔除小鼠模型研究抗骨質(zhì)疏松癥中藥的作用及

6、機制
　　目的：利用OPG基因剔除骨質(zhì)疏松癥模型小鼠，以阿侖膦酸鈉（福善美）為陽性對照，研究仙靈骨葆在抗骨質(zhì)疏松癥中的療效及作用機制。
　　方法：12只129SV小鼠，40只O T O基因剔除小鼠（雌雄各半），隨機分為四組：野生型小鼠（WT)+安慰劑組(WT+NS，n=12)，OPG基因剔除小鼠（KO)+安慰劑組(KO+NS，n=12)；OPG基因剔除小鼠+阿侖膦酸鈉組(KO+ALEN，0.2 mg.kg-1.d-1，n=1

7、2)；OPG基因剔除小鼠+仙靈骨葆組(KO+XLGB，500 mg.kg-1.d-1，n=16)，持續(xù)治療12周后處死取材，Micro-CT檢測小鼠股骨及腰椎骨密度（BMD)及骨小梁結(jié)構(gòu)，病理切片觀察骨形態(tài)，三點彎曲實驗和壓縮實驗檢測股骨和腰椎骨生物力學(xué)指標，ELISA方法測定血清OPG和 RANKL蛋白表達水平，Real-time PCR方法測定脛骨RANKL表達水平。
　　結(jié)果：持續(xù)喂藥12周后，KO+NS組B M D(634

8、.35±66.28 mg/cm2)較 WT+NS組(366.69±67.81 mg/cm2)顯著下降42%，骨小梁結(jié)構(gòu)顯著破壞，骨生物力學(xué)指標顯著降低；給予仙靈骨葆治療12周后，KO+XLGB組BMD(369.42±36.66 mg/cm2)、骨小梁結(jié)構(gòu)和骨生物力學(xué)指標與K O+N S組相比較無顯著變化(P>0.05)。阿侖膦酸鈉皮下注射12周后，KO+ALEN組BMD(616.03±51.31 mg/cm2)與KO+NS組比較提高68

9、%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，骨小梁結(jié)構(gòu)顯著改善（P<0.01)，骨生物力學(xué)指標顯著提高（P<0.01)。ELISA檢測血清OPG蛋白表達水平顯示W(wǎng)T組 OPG蛋白水平為2.71±0.25 ng/ml，KO小鼠血清中無OPG蛋白表達。與KO+NS組相比，KO+XLGB組血清和骨組織中RANKL表達水平無顯著變化（P>0.05)，KO+ALEN組RANKL水平顯著增高(P<0.01，P<0.05)。
　　結(jié)論：中藥仙靈骨葆在