川阿格雷的毒代動力學及藥物暴露對代謝的影響.pdf

1、川阿格雷是基于傳統(tǒng)中藥機理，運用現(xiàn)代技術合成的新一代血小板凝集抑制劑。本文的工作旨在對其毒代動力學和體內(nèi)相互作用作一整體評價，以支持人體藥代動力學研究并為臨床用藥提供參考依據(jù)。
　　 一、生物樣品中川阿格雷分析方法的建立
　　 本文采用液液萃取法處理血漿樣品，建立了以桂皮醛為內(nèi)標的反相高效液相色譜-紫外光譜檢測川阿格雷的體內(nèi)分析方法。色譜分離條件為：色譜柱DiamonsilC18(5μm，100×4.6mm)；流動相組成

2、為乙腈、水及用來調(diào)節(jié)pH的乙酸銨(pH4.4)，流速為1mL/min；紫外檢測波長為276nm，柱溫30℃。采用本文建立的生物樣品預處理方法和反相高效液相色譜法分離測定生物樣品中川阿格雷的含量，生物樣品預處理方法回收率高，色譜分離選擇性好。本法的準確度、精密度、靈敏度、專屬性和定量線性范圍均達到生物樣品分析的要求，該方法成功用于川阿格雷在Beagle犬與SD大鼠體內(nèi)的毒代動力學研究。
　　 二、肝微粒體中CYP450酶亞型特異性

3、底物及其代謝產(chǎn)物定量分析方法的建立
　　 本文采用液液萃取法處理肝微粒體溫孵樣品，建立了以原兒茶酸、利眠寧和非那西丁為內(nèi)標的反相高效液相色譜-紫外光譜檢測CYP450酶亞型特異性底物及其代謝產(chǎn)物的分析方法。色譜分離條件為：色譜柱迪馬DiamonsilC18(5μm，150×4.6mm)；非那西丁(CYP1A2底物)：流動相甲醇(0.1％甲酸)(A)-水(0.1％甲酸)(B)，梯度洗脫0～5min18％A、5～10min18％～6

4、0％A、10～15min60％A，流速1.0mL/min，紫外檢測波長為247nm，柱溫30℃；咪達嘩侖(CYP3A4底物)：流動相甲醇(A)-水(0.02％甲酸)(B)，梯度洗脫0～11min40％～60％A，流速1.0mL/min，紫外檢測波長為223nm，柱溫30℃；氯唑沙宗(CYP2E1底物)：流動相甲醇(A)-水(B)，梯度洗脫0～10min37％～75％A，流速1.0mL/min，紫外檢測波長為287nm，柱溫25℃。采用本

5、文建立的樣品預處理方法和反相高效液相色譜法分離測定溫孵樣品中特征底物及代謝產(chǎn)物的含量，方法回收率高，色譜分離選擇性好，準確度、精密度、專屬性和定量線性范圍均達到生物樣品分析的要求，該方法成功用于川阿格雷對SD大鼠肝微粒體酶活性影響的研究。
　　 三、川阿格雷在動物體內(nèi)的毒代動力學研究
　　 本試驗設計成年、健康Beagle犬多劑量靜脈注射給藥川阿格雷生理鹽水注射液40、80和160mg/Kg三個劑量組進行毒代動力學研究。

6、選擇18條Beagle犬，雌雄各半，按體重隨機分成低、中、高劑量三個劑量組，每一劑量組6條Beagle犬。每組Beagle犬一周給藥6次(每天給藥1次)，第七天停藥。采用緩慢靜脈推注方式給藥，給藥周期為90天。于給藥前及給藥后第1，43，88天取血，每次取血點分別為給藥后0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、12.0、24.0h。用上述建立的HPLC-UV法測定血漿中川阿格雷的濃度，根據(jù)所得的血漿藥物濃度-時間曲線，采用非房室模型

7、推算藥物動力學參數(shù)。結果顯示藥物在低劑量、中劑量長期靜脈注射給藥時對機體沒有明顯損傷，在高劑量長期靜脈注射給藥時對機體存在一定損傷，引起代謝或排泄功能減弱而導致最大血藥濃度(C0)增大。
　　 本試驗設計健康SD大鼠多劑量腹腔注射給藥川阿格雷生理鹽水注射液80、160和320mg/Kg三個劑量組進行毒代動力學研究。選擇18只SD大鼠，雌雄各半，按體重隨機分成低、中、高劑量三個劑量組，每一劑量組6只SD大鼠。每組SD大鼠一周給藥6

8、次(每天給藥1次)，第七天停藥，采用緩慢腹腔注射方式給藥，給藥周期為90天。于給藥前及給藥后第1，44，91天取血，每次取血點分別為給藥后0.833、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、12.0、24.0h。用上述建立的HPLC-UV法測定血漿中川阿格雷的濃度，根據(jù)所得的血漿藥物濃度-時間曲線，采用非房室模型推算藥物動力學參數(shù)。結果顯示藥物在低劑量、中劑量長期腹腔注射給藥時對機體沒有明顯損傷，在高劑量長期腹腔注射給藥時對機體存在一定

9、損傷，引起代謝或排泄功能減弱而導致最大血藥濃度(Cmax)增大。
　　 四、川阿格雷暴露水平影響大鼠肝微粒體代謝酶活性的研究
　　 本試驗選擇健康SD大鼠多劑量注射川阿格雷注射液15mg/Kg、80mg/Kg、160mg/Kg、320mg/Kg，進行川阿格雷影響大鼠肝微粒體代謝酶活性的研究。選擇36只SD大鼠，雌雄各半，分成對照組和給藥組，每組6只，給藥組尾靜脈注射給予川阿格雷15mg/Kg，腹腔注射給予川阿格雷80mg

10、/Kg、160mg/Kg、320mg/Kg，每天2次，連續(xù)7天；對照組給予相同劑量注射用生理鹽水，7天后制備肝微粒體蛋白溫孵探針底物，采用BCA蛋白濃度測定方法測定蛋白含量，采用高效液相色譜法測定CYP1A2，CYP3A4和CYP2E1探針底物的代謝產(chǎn)物含量，評價CYP1A2，CYP3A4和CYP2E1的活性。結果顯示給藥15mg/Kg后，CYP1A2，CYP2E1的活性未受影響，CYP3A4的活性受到抑制；給藥80mg/Kg后，CYP