抗腫瘤新藥德氮吡格的藥物代謝動力學研究.pdf

1、本課題研究的德氮吡格(Tetrazanbigen，TNBG)是自主創(chuàng)新設計合成的含2-苯基萘三環(huán)共平面的氮雜甾烷類化合物。經(jīng)體內(nèi)、外實驗證明，TNBG具有良好的抗腫瘤作用，能顯著延長荷瘤動物的生存期，且無交叉耐藥性。其作用機制主要是干擾腫瘤細胞脂代謝引起腫瘤細胞內(nèi)大量脂質(zhì)聚積，影響其功能，達到抗腫瘤的目的。 TNBG的抗腫瘤作用機制與目前臨床上常用的細胞毒類抗腫瘤藥物截然不同，在深入研究作用機制的基礎上，研究藥物代謝動力學，這對

2、于TNBG的研發(fā)具有重要的理論意義和應用價值。 藥物代謝動力學(Pharmacokinetics，PK)是應用動力學原理與數(shù)學處理方法，定量描述藥物在體內(nèi)的動態(tài)變化規(guī)律，即研究通過各種途徑進入生物體藥物的吸收(absorption)、分布(distribution)、代謝(metabolism)和排泄(excretion)，即ADME過程，并探討藥物在體內(nèi)發(fā)生的代謝或者生物轉化途徑。藥物動力學的核心是闡明體內(nèi)藥物的濃度隨時間變化

3、的動態(tài)過程，藥物代謝學是探討藥物分子化學結構在體內(nèi)發(fā)生的生物轉化，了解藥物的代謝圖譜，這對于指導開發(fā)新藥、臨床合理安全用藥具有十分重要的意義。 本文的目標是研究TNBG的體內(nèi)藥物動力學過程及其體外代謝情況，開展的主要工作有以下四個方面： 1．建立了HPLC測定TNBG含量的方法。選用C<,18>柱，紫外檢測波長260nm，流動相甲醇：0.1％三乙胺水溶液(pH6.5)，體積比90:10，流速1.0mL·min<'-1>，

4、柱溫30℃。該方法簡便易行、穩(wěn)定性好、重現(xiàn)性高。 2．建立了TNBG在生物樣品中的分離與測定方法。色譜條件與TNBG含量測定方法一樣。血漿、肝、肺、腎、腦、心等組織的生物樣品都以甲醇作為除蛋白試劑，經(jīng)C<,18>固相萃取純化，用RP-HPLC法對生物樣品進行測定。通過預處理及HPLC條件優(yōu)化，所有內(nèi)源性物質(zhì)對TNBG測定均無干擾。各組織中的TNBG濃度在2-20μg·mL<'-1>范圍內(nèi)均呈現(xiàn)良好的線性關系(r>0.99)，樣品

5、平均回收率大于85％，RSD小于6％。日內(nèi)精密度RSD小于10％，日間精密度RSD小于9％。 3．研究了TNBG的藥代動力學。采用建立的TNBG生物樣品測定方法進行了小鼠藥代動力學實驗，探討了TNBG在小鼠體內(nèi)動態(tài)變化的規(guī)律及其特點。 以靜脈給藥方式進行的吸收動力學實驗結果表明，TNBG在小鼠體內(nèi)的動力學符合二室模型。單次10、20、30mg·kg<'-1>給藥后，三個劑量組的濃度．時間曲線下面積(AUC<,(0-t)>

6、)分別為：5.874±1.65、24.757±7.632和34.575±1.599 μg·mL<'-1>·h；分布半衰期t<,1/2>(α)>分別為：0.086±0.025、0.073±0.029和0.061±0.004 h；消除半衰期t<,1/2(β)>分別為：5.752±1.757、8.488±1.848、6.821±0.636 h。 在分布實驗中，采用HPLC法測定單次TNBG(10mg·kg<'-1>)靜脈注射給藥后小鼠

7、各組織中原形藥物在5個不同時間點的濃度，其結果表明TNBG在體內(nèi)分布較廣泛而迅速，其中以肺分布最多，依次為脾>腎>肝>腦>心。 在排泄實驗中，小鼠尾靜脈注射TNBG(10mg·kg<'-1>)后，用HPLC法測定表明，原形藥物的排泄主要通過糞便排泄，只有少量通過膽汁排泄；用LC/MS法測定發(fā)現(xiàn)，TNBG在小鼠尿液、糞便和膽汁中的代謝物為含氧的代謝物，其中尿液可見原形藥物TN-BG的[M+1]<'+>(m/z289)峰，以及[M+

8、14]<'+>(m/z 302)，[M+30]<',+>(m/z 318)，[M+33]<'+>(m/z321)，[M+45]<'+>(m/z 333)代謝的峰。膽汁中可見[M+14]<'+>(m/z 302)，[M+45]<'+>(m/z 333)代謝的峰。糞便中可見原形藥物TNBG的[M+1]<'+>(m/z 289)，以及[M+14]<'+>(m/z 302)代謝的峰。根據(jù)TNBG藥物結構推測，這4個代謝產(chǎn)物主要為加氧和(或)羥基

9、化代謝產(chǎn)物，但加氧及其羥基化位置有待進一步研究確定。 另外，本實驗采用間接方法，小鼠尾靜脈注射TNBG(10 mg·kg<'-1>)6h后，采血，分離血漿，用平衡透析法測得FNBG的血漿蛋白結合率為88％以上。這對于指導臨床用藥配伍和設計最適給藥方案具有重要的理論意義和實用價值。 4．進行了TNBG的體外代謝實驗研究。 根據(jù)上述實驗結果，結合TNBG結構特征，主要選擇了CYP2C9、CYP2D6和CYP3A4三種

10、代謝酶進行考察，用大鼠肝微粒體體外孵育實驗方法，采用LC/MS測定，其實驗結果顯示，磺胺苯吡唑、奎尼丁、酮康唑對TNBG的代謝都有不同程度的抑制作用，由此表明CYP2C9、CYP2D6和CYP3A4三種代謝酶都可能參與了TNBG的代謝，具體的代謝產(chǎn)物及其代謝機制有待進一步深入研究。 綜上所述，本文進行了TNBG的小鼠藥代動力學實驗，探討了TNBG在小鼠體內(nèi)動態(tài)變化的規(guī)律及其特點，確定了CYP450在TNBG代謝中的作用，發(fā)現(xiàn)CY