鹽酸雷諾嗪藥代動力學和毒代動力學研究.pdf

1、1．生物樣品中鹽酸雷諾嗪分析方法的建立 目的:采用蛋白沉淀法處理血漿和組織樣品，建立以勞拉西泮為內(nèi)標的高效液相一二級質(zhì)譜法(HPLC/MS/MS)檢測鹽酸雷諾嗪的體內(nèi)分析方法。 方法:色譜分離條件為：色譜柱：Eclipse XDB-C8柱(5 μ m，4.6×150 mm)；流動相組成為乙睛一水一甲酸(70/30/0.1，v/v) (PH=4.5)，流速為0.8 ml·min<'-1>；二級質(zhì)譜檢測離子對為：鹽酸雷諾嗪

2、(m/z 428.4/279.3)，內(nèi)標(m/z321.3/303.3)，柱溫35℃。 結果:建立生物樣品預處理方法和HPLC/MS/MS法測定生物樣品中鹽酸雷諾嗪的含量，生物樣品預處理方法回收率較高，色譜分離選擇性好。生物樣品中的內(nèi)源性雜質(zhì)不干擾鹽酸雷諾嗪的測定，日間和日內(nèi)的變異系數(shù)小于15﹪。生物樣品最低定量限為0.0156 mg·L<'-1>，標準曲線的相關系數(shù)R>0.99，質(zhì)控樣本及凍融實驗符合要求，樣品處理簡單、快速

3、，僅需微量的樣品，而且其方法的靈敏度、重現(xiàn)性和精密度均較好。 結論:本法的準確度、精密度、靈敏度、專屬性和定量線性范圍均達到體內(nèi)藥物分析的要求。該方法可用于鹽酸雷諾嗪的臨床前藥代動力學和毒代動力學研究。 2.鹽酸雷諾嗪單次給藥藥代動力學研究和毒代動力學研究 2.1 Beagle犬單次給藥鹽酸雷諾嗪的藥代動力學和毒代動力學特征 目的:闡明犬單次經(jīng)口給藥鹽酸雷諾嗪的的藥代動力學和毒代動力學特征。比較有效劑量和

4、最大耐受劑量下犬單次給藥，鹽酸雷諾嗪于犬體內(nèi)的差異。 方法:取24只成年、健康Beagle犬，隨機分為四組，分別單次經(jīng)口給予鹽酸雷諾嗪12.5、25、50和120 mg·kg<'-1>，于藥前和藥后0.25、0.5、0.75、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、12.0、24.0小時取血，用HPLC/MS/MS法測定血漿中的鹽酸雷諾嗪濃度，根據(jù)所得的血漿藥物一時間曲線，采用房室模型和非房室模型推算藥代動力學參

5、數(shù)。 結論:各劑量組給藥后，鹽雷諾嗪吸收迅速，1小時左右達峰，體內(nèi)消除半衰期為4～5小時，給藥后24小時體內(nèi)藥物基本消除完全，個體差異較大。在12.5，25，50和120 mg·kg<'-1>劑量下，鹽酸雷諾嗪在Beagle犬體內(nèi)藥時曲線下面積與給藥劑量成正相關，相關系數(shù)為0.9847，鹽酸雷諾嗪體內(nèi)過程為線性。鹽酸雷諾嗪經(jīng)口給藥起始有效曲線下面積為3.088±1.369 mg.h·L<'-1>。 2.2大鼠單次灌胃給藥

6、鹽酸雷諾嗪藥代動力學和毒代動力學特征 目的:研究大鼠單次灌胃給予鹽酸雷諾嗪的的藥代動力學和毒代動力學特征。 方法:取wistar大鼠182只，雌雄各半，按體重隨機分為4組。分別灌胃給藥25、50、100和200 mg·kg<'-1>鹽酸雷諾嗪(以雷諾嗪計)，給藥容積(1ml/100g)。給藥前，動物需禁食12小時，給藥后繼續(xù)禁食3小時。分別于給藥前和給藥后0.25、0.5、1.75、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0

7、、6.1、8.0、12.0、24.0小時從靜脈竇取血離心取血漿。用HPLC-MS/MS法測定血漿中的鹽酸雷諾嗪濃度，根據(jù)所得的血漿藥物-時間曲線，非房室模型推算藥物動力學參數(shù)。 結果:灌胃給藥，鹽酸雷諾嗪大鼠體內(nèi)的藥代動力學過程存在性別差異。灌胃給予25、50、100、200mg·kg<'-1>鹽酸雷諾嗪后，雄性大鼠半衰期分別為0.799、1.545、1.645、2.737小時，達峰時間分別為1、0.25、0.5小時，峰濃度分別

8、為：0.8558、1.94、5.556、7.906 mg·L<'-1>，曲線下面積分別為1.618、2.875、13.877、33.64 mg.h·L<'-1>。雌性大鼠半衰期分別為2.356、3.15、3.81、4.951小時；達峰時間分別為0.5、0.5、0.75、6小時；峰濃度分別為：3.427、558、21.78、32.566 mg·L<'-1>；曲線下面積分別為13.899、31.829、113.826、201.185 mg.

9、h·L<'-1>。 結論: 藥物吸收快，一般0.25～1小時達峰，動物個體差異較大。鹽酸雷諾嗪大鼠藥代動力學過程存在性別差異，在雌性大鼠體內(nèi)暴露量大，藥時曲線下面積為雄性的5.98～11.07倍；在雌性大鼠體內(nèi)的消除慢，消除半衰期為雄性大鼠的2～3倍。雌雄大鼠各劑量組的藥時曲線下面積與給藥劑量正相關，相關系數(shù)分別為0.9903和0.98，提示鹽酸雷諾嗪大鼠體內(nèi)藥代動力學過程為線性。 2．3鹽酸雷諾嗪大鼠組織分布特征

10、 目的:評價鹽酸雷諾嗪在大鼠體內(nèi)的組織分布特點，提示藥物濃度高、蓄積時間長的組織和器官，幫助確定毒性靶器官和解釋毒理學結果。 方法:Wi star大鼠灌胃給藥鹽酸雷諾嗪200 mg·kg<'-1>后，于藥后0.25、0.5、1、3、6、12、24小時靜脈竇取血后處死，立即取血液及各臟器組織，用濾紙吸干浮血，稱重后均漿。用HPLC/MS/MS法測定各組織藥物濃度。 結果:大鼠灌胃0.25小時，鹽酸雷諾嗪在大鼠的12個受檢

11、器官內(nèi)均有不同程度的分布。雄性大鼠：給藥0.5小時，組織內(nèi)藥物濃度降序依次為：胃、肝、腎、肺、心臟、脾臟、骨骼肌、小腸、睪丸、脂肪、腦、腎上腺； 1小時后依次為：胃、小腸、腎、肝、脾、肺、心臟、骨骼肌、腎上腺、睪丸、腦、脂肪；以后除腎臟外，各器官藥物濃度逐漸降低。6小時后依次為：腎、心臟、胃、肝、肺、脾、小腸、腎上腺、脂肪、骨骼肌、睪丸、腦。雌性大鼠：給藥0.5小時，組織內(nèi)藥物濃度降序依次為：胃、肝、腎、小腸、心臟、脾、肺、骨骼肌、卵

12、巢、腎上腺、脂肪、腦；1小時后依次為：胃、腎臟、小腸、脾、肝、心臟、卵巢、腎上腺、肺、骨骼肌、脂肪、腦；以后除腎臟、肺部(3小時達峰)外，各器官藥物濃度逐漸降低。6小時后依次為：腎、肝、小腸、脾、肺、腎上腺、胃、心臟、脂肪、腦、骨骼肌、卵巢。 結論:鹽酸雷諾嗪吸收較快，能迅速分布到以胃、小腸、肝、腎為主的12個待檢組織內(nèi)，大多于0.5～1小時達峰。與大鼠單次給藥毒代動力學研究結果一致。鹽酸雷諾嗪大鼠體內(nèi)組織分布存在性別差異，藥后

13、各時間點雌性大鼠各組織器官的濃度普遍高于雄性大鼠，且消除慢，以肝臟、肺臟、脾臟和腎上腺尤其顯著。藥物在藥效學靶器官心臟和毒性靶器官腎上腺未見蓄積。 三、鹽酸雷諾嗪犬重復給藥毒代動力學研究 目的:檢測鹽酸雷諾嗪重復給藥于犬體內(nèi)的暴露和蓄積情況。結合毒性研究結果確定藥物無毒反應劑量和毒性反應劑量，全面認識藥物毒性作用過程和毒性機制。 方法:Beagle犬經(jīng)口給予鹽酸雷諾嗪20、40、80 mg·kg<'-1>，每周給

14、藥6天，每天給藥一次，連續(xù)給藥周期為13周。按長期毒性實驗研究方法評價藥物毒性，并于給藥后的第1和91天取血，取血點為藥后的0.25、0.5、0.75、1.0、1.5、2.0、3.O、4.0、6.0、8.0、12.0、24.0小時。給藥后恢復期第7、14和21天于上午8點取血。HPLC/MS/MS法檢測Beagle犬體內(nèi)鹽酸雷諾嗪血藥濃度，繪制血藥濃度一時間曲線，采用房室模型和非房室模型推算藥物動力學參數(shù)。 結果:鹽酸雷諾嗪20

15、 mg·kg<'-1>·d<'-1>給藥后動物無明顯癥狀，與對照組(Vetl)組比較無異常。40 mg·kg<'-1>·d<'-1>給藥可致動物體重增長減緩，其增長幅度明顯低于Veh組，個別動物腎上腺空泡變性，其它未見明顯異常。80 mg·kg<'-1>·d<'-1>給藥犬普遍出現(xiàn)自主活動降低等多種毒性反應，長期給藥可造成犬腎上腺空泡變性。第一天給藥后，20，40和80 mg、kg<'-1>三個劑量組的平均達峰時間分別為0.958±0.

16、102，1.333±0.258，1.083±0.204小時，平均達峰濃度分別為1.997±0.249，3.49±0.401，16.105±1.74 mg·L<'-1>，統(tǒng)計矩藥時曲線下面積分別為：3.428±0.133，9.481±1.339，33.944±5.4 mg.h·L<'-1>。在第91天給藥后，三個劑量組的平均達峰時間分別為0.958±0.102，0.958±0.102，0.958±0.102小時，平均達峰濃度分別為2.27

17、±0.209，4.973±0.491，22.46±4.972 mg·L<'-1>，統(tǒng)計矩藥時曲線下面積分別為：3.909±0.824，11.06±0.676，50.611±12.658 mg·h·L<'-1>?；謴推诘?天犬體內(nèi)藥物濃度已低于最低定量限。 結論:鹽酸雷諾嗪在長期毒性條件下，各劑量組藥物吸收快，達峰濃度較高，停藥后消除快，動物個體差異較大。鹽酸雷諾嗪在Beagle犬體內(nèi)呈線性動力學過程，給藥劑量與藥時曲線下面積呈正