鹽酸雷諾嗪藥代動力學(xué)和毒代動力學(xué)研究.pdf

1、1．生物樣品中鹽酸雷諾嗪分析方法的建立 目的:采用蛋白沉淀法處理血漿和組織樣品，建立以勞拉西泮為內(nèi)標(biāo)的高效液相一二級質(zhì)譜法(HPLC/MS/MS)檢測鹽酸雷諾嗪的體內(nèi)分析方法。 方法:色譜分離條件為：色譜柱：Eclipse XDB-C8柱(5 μ m，4.6×150 mm)；流動相組成為乙睛一水一甲酸(70/30/0.1，v/v) (PH=4.5)，流速為0.8 ml·min<'-1>；二級質(zhì)譜檢測離子對為：鹽酸雷諾嗪

2、(m/z 428.4/279.3)，內(nèi)標(biāo)(m/z321.3/303.3)，柱溫35℃。 結(jié)果:建立生物樣品預(yù)處理方法和HPLC/MS/MS法測定生物樣品中鹽酸雷諾嗪的含量，生物樣品預(yù)處理方法回收率較高，色譜分離選擇性好。生物樣品中的內(nèi)源性雜質(zhì)不干擾鹽酸雷諾嗪的測定，日間和日內(nèi)的變異系數(shù)小于15﹪。生物樣品最低定量限為0.0156 mg·L<'-1>，標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)R>0.99，質(zhì)控樣本及凍融實驗符合要求，樣品處理簡單、快速

3、，僅需微量的樣品，而且其方法的靈敏度、重現(xiàn)性和精密度均較好。 結(jié)論:本法的準(zhǔn)確度、精密度、靈敏度、專屬性和定量線性范圍均達到體內(nèi)藥物分析的要求。該方法可用于鹽酸雷諾嗪的臨床前藥代動力學(xué)和毒代動力學(xué)研究。 2.鹽酸雷諾嗪單次給藥藥代動力學(xué)研究和毒代動力學(xué)研究 2.1 Beagle犬單次給藥鹽酸雷諾嗪的藥代動力學(xué)和毒代動力學(xué)特征 目的:闡明犬單次經(jīng)口給藥鹽酸雷諾嗪的的藥代動力學(xué)和毒代動力學(xué)特征。比較有效劑量和

4、最大耐受劑量下犬單次給藥，鹽酸雷諾嗪于犬體內(nèi)的差異。 方法:取24只成年、健康Beagle犬，隨機分為四組，分別單次經(jīng)口給予鹽酸雷諾嗪12.5、25、50和120 mg·kg<'-1>，于藥前和藥后0.25、0.5、0.75、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、12.0、24.0小時取血，用HPLC/MS/MS法測定血漿中的鹽酸雷諾嗪濃度，根據(jù)所得的血漿藥物一時間曲線，采用房室模型和非房室模型推算藥代動力學(xué)參

5、數(shù)。 結(jié)論:各劑量組給藥后，鹽雷諾嗪吸收迅速，1小時左右達峰，體內(nèi)消除半衰期為4～5小時，給藥后24小時體內(nèi)藥物基本消除完全，個體差異較大。在12.5，25，50和120 mg·kg<'-1>劑量下，鹽酸雷諾嗪在Beagle犬體內(nèi)藥時曲線下面積與給藥劑量成正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.9847，鹽酸雷諾嗪體內(nèi)過程為線性。鹽酸雷諾嗪經(jīng)口給藥起始有效曲線下面積為3.088±1.369 mg.h·L<'-1>。 2.2大鼠單次灌胃給藥

6、鹽酸雷諾嗪藥代動力學(xué)和毒代動力學(xué)特征 目的:研究大鼠單次灌胃給予鹽酸雷諾嗪的的藥代動力學(xué)和毒代動力學(xué)特征。 方法:取wistar大鼠182只，雌雄各半，按體重隨機分為4組。分別灌胃給藥25、50、100和200 mg·kg<'-1>鹽酸雷諾嗪(以雷諾嗪計)，給藥容積(1ml/100g)。給藥前，動物需禁食12小時，給藥后繼續(xù)禁食3小時。分別于給藥前和給藥后0.25、0.5、1.75、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0

7、、6.1、8.0、12.0、24.0小時從靜脈竇取血離心取血漿。用HPLC-MS/MS法測定血漿中的鹽酸雷諾嗪濃度，根據(jù)所得的血漿藥物-時間曲線，非房室模型推算藥物動力學(xué)參數(shù)。 結(jié)果:灌胃給藥，鹽酸雷諾嗪大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)過程存在性別差異。灌胃給予25、50、100、200mg·kg<'-1>鹽酸雷諾嗪后，雄性大鼠半衰期分別為0.799、1.545、1.645、2.737小時，達峰時間分別為1、0.25、0.5小時，峰濃度分別

8、為：0.8558、1.94、5.556、7.906 mg·L<'-1>，曲線下面積分別為1.618、2.875、13.877、33.64 mg.h·L<'-1>。雌性大鼠半衰期分別為2.356、3.15、3.81、4.951小時；達峰時間分別為0.5、0.5、0.75、6小時；峰濃度分別為：3.427、558、21.78、32.566 mg·L<'-1>；曲線下面積分別為13.899、31.829、113.826、201.185 mg.

9、h·L<'-1>。 結(jié)論: 藥物吸收快，一般0.25～1小時達峰，動物個體差異較大。鹽酸雷諾嗪大鼠藥代動力學(xué)過程存在性別差異，在雌性大鼠體內(nèi)暴露量大，藥時曲線下面積為雄性的5.98～11.07倍；在雌性大鼠體內(nèi)的消除慢，消除半衰期為雄性大鼠的2～3倍。雌雄大鼠各劑量組的藥時曲線下面積與給藥劑量正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.9903和0.98，提示鹽酸雷諾嗪大鼠體內(nèi)藥代動力學(xué)過程為線性。 2．3鹽酸雷諾嗪大鼠組織分布特征

10、 目的:評價鹽酸雷諾嗪在大鼠體內(nèi)的組織分布特點，提示藥物濃度高、蓄積時間長的組織和器官，幫助確定毒性靶器官和解釋毒理學(xué)結(jié)果。 方法:Wi star大鼠灌胃給藥鹽酸雷諾嗪200 mg·kg<'-1>后，于藥后0.25、0.5、1、3、6、12、24小時靜脈竇取血后處死，立即取血液及各臟器組織，用濾紙吸干浮血，稱重后均漿。用HPLC/MS/MS法測定各組織藥物濃度。 結(jié)果:大鼠灌胃0.25小時，鹽酸雷諾嗪在大鼠的12個受檢

11、器官內(nèi)均有不同程度的分布。雄性大鼠：給藥0.5小時，組織內(nèi)藥物濃度降序依次為：胃、肝、腎、肺、心臟、脾臟、骨骼肌、小腸、睪丸、脂肪、腦、腎上腺； 1小時后依次為：胃、小腸、腎、肝、脾、肺、心臟、骨骼肌、腎上腺、睪丸、腦、脂肪；以后除腎臟外，各器官藥物濃度逐漸降低。6小時后依次為：腎、心臟、胃、肝、肺、脾、小腸、腎上腺、脂肪、骨骼肌、睪丸、腦。雌性大鼠：給藥0.5小時，組織內(nèi)藥物濃度降序依次為：胃、肝、腎、小腸、心臟、脾、肺、骨骼肌、卵

12、巢、腎上腺、脂肪、腦；1小時后依次為：胃、腎臟、小腸、脾、肝、心臟、卵巢、腎上腺、肺、骨骼肌、脂肪、腦；以后除腎臟、肺部(3小時達峰)外，各器官藥物濃度逐漸降低。6小時后依次為：腎、肝、小腸、脾、肺、腎上腺、胃、心臟、脂肪、腦、骨骼肌、卵巢。 結(jié)論:鹽酸雷諾嗪吸收較快，能迅速分布到以胃、小腸、肝、腎為主的12個待檢組織內(nèi)，大多于0.5～1小時達峰。與大鼠單次給藥毒代動力學(xué)研究結(jié)果一致。鹽酸雷諾嗪大鼠體內(nèi)組織分布存在性別差異，藥后

13、各時間點雌性大鼠各組織器官的濃度普遍高于雄性大鼠，且消除慢，以肝臟、肺臟、脾臟和腎上腺尤其顯著。藥物在藥效學(xué)靶器官心臟和毒性靶器官腎上腺未見蓄積。 三、鹽酸雷諾嗪犬重復(fù)給藥毒代動力學(xué)研究 目的:檢測鹽酸雷諾嗪重復(fù)給藥于犬體內(nèi)的暴露和蓄積情況。結(jié)合毒性研究結(jié)果確定藥物無毒反應(yīng)劑量和毒性反應(yīng)劑量，全面認識藥物毒性作用過程和毒性機制。 方法:Beagle犬經(jīng)口給予鹽酸雷諾嗪20、40、80 mg·kg<'-1>，每周給

14、藥6天，每天給藥一次，連續(xù)給藥周期為13周。按長期毒性實驗研究方法評價藥物毒性，并于給藥后的第1和91天取血，取血點為藥后的0.25、0.5、0.75、1.0、1.5、2.0、3.O、4.0、6.0、8.0、12.0、24.0小時。給藥后恢復(fù)期第7、14和21天于上午8點取血。HPLC/MS/MS法檢測Beagle犬體內(nèi)鹽酸雷諾嗪血藥濃度，繪制血藥濃度一時間曲線，采用房室模型和非房室模型推算藥物動力學(xué)參數(shù)。 結(jié)果:鹽酸雷諾嗪20

15、 mg·kg<'-1>·d<'-1>給藥后動物無明顯癥狀，與對照組(Vetl)組比較無異常。40 mg·kg<'-1>·d<'-1>給藥可致動物體重增長減緩，其增長幅度明顯低于Veh組，個別動物腎上腺空泡變性，其它未見明顯異常。80 mg·kg<'-1>·d<'-1>給藥犬普遍出現(xiàn)自主活動降低等多種毒性反應(yīng)，長期給藥可造成犬腎上腺空泡變性。第一天給藥后，20，40和80 mg、kg<'-1>三個劑量組的平均達峰時間分別為0.958±0.

16、102，1.333±0.258，1.083±0.204小時，平均達峰濃度分別為1.997±0.249，3.49±0.401，16.105±1.74 mg·L<'-1>，統(tǒng)計矩藥時曲線下面積分別為：3.428±0.133，9.481±1.339，33.944±5.4 mg.h·L<'-1>。在第91天給藥后，三個劑量組的平均達峰時間分別為0.958±0.102，0.958±0.102，0.958±0.102小時，平均達峰濃度分別為2.27

17、±0.209，4.973±0.491，22.46±4.972 mg·L<'-1>，統(tǒng)計矩藥時曲線下面積分別為：3.909±0.824，11.06±0.676，50.611±12.658 mg·h·L<'-1>?；謴?fù)期第7天犬體內(nèi)藥物濃度已低于最低定量限。 結(jié)論:鹽酸雷諾嗪在長期毒性條件下，各劑量組藥物吸收快，達峰濃度較高，停藥后消除快，動物個體差異較大。鹽酸雷諾嗪在Beagle犬體內(nèi)呈線性動力學(xué)過程，給藥劑量與藥時曲線下面積呈正