雷帕霉素對(duì)小鼠記憶T細(xì)胞的體外作用.pdf

1、第一部分:建立小鼠皮膚移植排斥模型穩(wěn)定獲得記憶T細(xì)胞 目的：建立一種穩(wěn)定的通過(guò)小鼠皮膚移植獲得小鼠記憶T細(xì)胞的方法，為研究藥物對(duì)小鼠記憶T細(xì)胞的體外作用做準(zhǔn)備。 方法：以C57BL/6小鼠為受者、DBA/2小鼠為供者行皮膚移植；同時(shí)行C57BL/6小鼠行同種同系皮膚移植做對(duì)照。術(shù)后1-8周，每周取小鼠脾臟，使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)所有受體鼠脾單個(gè)核細(xì)胞懸液中記憶T細(xì)胞的比例(n=6)。 結(jié)論：接受同種異系皮膚抗原刺激4

2、-5周后，小鼠記憶T細(xì)胞發(fā)生穩(wěn)態(tài)增殖，此模型可以穩(wěn)定的獲得小鼠記憶T細(xì)胞。 第二部分:雷帕霉素對(duì)小鼠記憶T細(xì)胞的體外作用 目的：探討雷帕霉素對(duì)小鼠記憶T細(xì)胞的體外生長(zhǎng)及白介素-2(IL-2)表達(dá)的影響，比較其與初始T細(xì)胞對(duì)雷帕霉素的敏感性差異，并且初步探討雷帕霉素對(duì)小鼠記憶T細(xì)胞抑制作用的機(jī)制。 方法：取6周齡以下的C57BL/6小鼠脾臟制備成脾單個(gè)核細(xì)胞，使用免疫磁珠法分選出小鼠初始T淋巴細(xì)胞；取第一部分實(shí)驗(yàn)中

3、經(jīng)過(guò)同種異系皮膚移植存活6周以上的C57BL/6小鼠，熒光激活細(xì)胞分類(lèi)術(shù)(FACS fluorescence-activated cell sorting)分選出小鼠記憶T細(xì)胞。將分選出的小鼠初始和記憶T細(xì)胞分別加入0ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、30ng/ml梯度濃度的雷帕霉素培養(yǎng)液培養(yǎng)72h后，采用MTT法及Elisa法測(cè)定各組細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及IL-2表達(dá)情況。同樣于72小時(shí)后測(cè)定10ng/ml雷帕霉素濃度組及對(duì)照組(