雷帕霉素對體外培養(yǎng)的兔晶體上皮細胞增殖的影響.pdf

1、山東大學碩士學位論文雷帕霉素對體外培養(yǎng)的兔晶體上皮細胞增殖的影響姓名：趙杰申請學位級別：碩士專業(yè)：眼科學指導教師：蔡可麗20050420山東大學碩士學位論文雷帕霉素對體外培養(yǎng)的兔晶體上皮細胞增殖的影響研究生趙杰導師蔡可麗教授專業(yè)眼科學中文摘要目的雷帕霉素是一種新型的大環(huán)內酯類免疫抑制劑，近年來被廣泛運用于器官移植、惡性腫瘤治療、預防冠狀動脈狹窄等，眼科已有研究應用于動物的角膜移植。后發(fā)性自內障是自內障術后最嚴重的并發(fā)癥之一，其原因是由于

2、白內障術后殘留的晶體上皮細胞增殖、移行、轉化，從而在后囊膜上形成纖維膜，嚴重影響術后視力的恢復。本研究在體外培養(yǎng)兔晶體上皮細胞的基礎之上，旨在研究兔晶體細胞的體外生長特性，觀察不同濃度雷帕霉素對晶體上皮細胞形態(tài)、增殖等生物學活性的影響，并對其可能的作用機制加以初步探討，為臨床闡明后囊混濁的發(fā)病機理和探討防治措施提供實驗依據。方法晶體上皮細胞來自健康成年兔(15kg2okg)的晶體囊膜，將其放入DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)，達匯合點后細胞傳代，第

3、23代細胞用于實驗。(1)用組織塊培養(yǎng)法進行兔晶體上皮細胞的原代培養(yǎng)，光鏡下觀察細胞的形態(tài)。(2)將23代兔晶體上皮細胞以5104個／ml接種于96孔板，244時后分別加入雷帕霉素(0ng／nd，5ng／ml，10ng／ml20ng／ml，40ng／ml，SOng／m1)。加藥后于培養(yǎng)24d“時后，光鏡下觀察細胞形態(tài)，以MTT法測細胞增殖活性。(3)將23代兔晶體上皮細胞以5104個／ml接種于鋪有玻片的6孔板中，24小時后分別加入雷帕

4、霉素(0ng／ml，5ng／ml，lOng／ml，20ng／ml，40ng／ml，sOng／nd)。加藥后于培養(yǎng)24d“時后，光鏡下觀察細胞形態(tài)，取出細胞爬片，行髓染色，并以免疫組化sP法對PcNA進行檢測?！?取雷帕霉素(0ng／“20ng／m1)處理過的兔晶體上皮細胞各106爪，以流式細胞儀測細胞周期。(5)取雷帕霉素(0rig／rid，5ng／ml，lOng／ml20ng／ml，40ns／ml，80nrdml)處理過的兔晶體上皮細