芹菜素對(duì)腦缺血不同時(shí)間再灌注損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討炎癥反應(yīng)、氧化損傷和核轉(zhuǎn)錄因子κB(NF-κB)在大鼠腦缺血不同時(shí)間再灌注損傷中的作用以及芹菜素的神經(jīng)保護(hù)作用及機(jī)制. 方法：采用線栓法建立大鼠腦缺血(1.5h)及不同時(shí)間再灌注損傷模型.動(dòng)物隨機(jī)分為假手術(shù)組(Sham-opcrated,S,n=20)、模型組(Modd,M,n=80)和芹菜素組(Apigenin,A,n=80).M組和A組按再灌注時(shí)間不同又分為再灌注2411組(M24h,A<,24h>,n=20)、4

2、8h組(M<,48h>,A<,48h>,n=20)、72h組(M<,72h>,A<,72h>,n=20)、7d組(M<,7d>,A<,7d>,n=20),各4小組,共9小組.A組于再灌注同時(shí)及其后的每24h腹腔注射11.6×10<'-3>M芹菜素溶液25mg/kg(0.8ml/100g),S組和M組在相同的時(shí)間注射等體積生理鹽水.各組動(dòng)物麻醉清醒后均給予神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分.每組大鼠各8只觀察至規(guī)定時(shí)間予頸椎脫臼處死,取左側(cè)大腦半球(缺血再灌

3、注側(cè))制成腦組織勻漿,分別采用硫代巴比妥酸法(TBA)測(cè)MDA含量,黃嘌呤氧化酶(XTO)法測(cè)超氧化物歧化酶(SOD)活性,比色法測(cè)誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)活性,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測(cè)腫瘤壞死因子a(TNF-α)、白細(xì)胞介素1β(IL-1β)含量.此外,每組5只大鼠經(jīng)心臟灌注后做腦組織切片,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色觀察腦梗死灶,并用圖像處理軟件測(cè)梗死灶體積;每組7只大鼠經(jīng)心臟灌注固定后分別用免疫組化法檢

4、測(cè)NF-κBp65表達(dá)、光鏡及電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化. 結(jié)果： 1.神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分:M組在腦缺血再灌注后7d神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分較M組之前各時(shí)間點(diǎn)均有顯著減小(P<0.01或P<0.05).A組在腦缺血再灌注后7d神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分較24h和48h均有顯著減小(P<0.01),A組在再灌注后72h神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分較再灌注2411有減小(P<0.05).A組在再灌注后72h神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分較相應(yīng)時(shí)間M組有顯著減小(P<0.05),余各結(jié)

5、論:相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義. 2.腦組織切片TTC染色:M<,24h>組病灶側(cè)示白色梗死灶,多位于嗅溝上方的額顳頂葉皮質(zhì)和尾殼核;M<,48h>組梗死灶范圍擴(kuò)大,額顳頂葉皮質(zhì)和尾殼核梗死灶融合,梗死灶分別較M<,24h>組、M<,72h>組及M<,7d>組大,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01).A<,48h>組和A<,72h>組的梗死體積較相應(yīng)M組減小,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05).S組未見有白色梗死灶. 3.大

6、鼠腦組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)變化:M組病變側(cè)皮層、海馬的細(xì)胞水腫、間質(zhì)水腫明顯,呈空泡化,M<,48h>組病變最明顯;神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞均有核固縮表現(xiàn),胞漿細(xì)胞器擴(kuò)張、溶解,空泡化,膠質(zhì)細(xì)胞病變較神經(jīng)元嚴(yán)重,以M<,24h>組病變最明顯.A組各時(shí)間點(diǎn)組織水腫有減輕,神經(jīng)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變不明顯. 4.大鼠腦組織MDA含量、SOD活性測(cè)定:與S組比較,M組和A組各時(shí)間點(diǎn)MDA含量均有升高(P<0.01或P<0.05),M<,72h>組明顯高于

7、M<,24h>和M<,7d>組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05);A<,48h>組和A<,72h>組與相應(yīng)M組比較有顯著降低(p<0.05).M組和A<,24h>組及A<,48h>組SOD活性與S組比較顯著降低(P<0.01或P<0.05),其余組雖有降低,但與S組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.A組SOD活性均較相應(yīng)M組顯著升高(p<0.05),除外M<,24h>組. 5.大鼠腦組織TNF-α含量測(cè)定:與S組比較, M組和A組TNF-

8、α含量均顯著升高,尤以M組明顯(P<0.01).A<,48h>組和A<,72h>組較相應(yīng)M組顯著降低,以A72h組為著(P<0.01). 6.大鼠腦組織IL-1β含量測(cè)定:M組和A組IL-1β含量均較S組明顯升高(P<0.01或P<0.05),除外A<,7d>組.M<,48h>組較M<,24h>組顯著升高(P<0.05).A<,48h>組和A<,72h>組較相應(yīng)M組顯著降低(P<0.05). 7.大鼠腦組織iNOS活性測(cè)

9、定:與S組比較,M組和A組均明顯升高(P<0.05或P<0.01).M<,72h>組較M<,24h>組升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05).A<,72h>組和A<,7d>組較相應(yīng)M組顯著降低(P<0.05). 8.大鼠腦組織NF-kBp65表達(dá):M組和A組有明顯活化移位,其表達(dá)與S組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),除外A<,7d>組.A<,72h>組和A<,7d>組較相應(yīng)M組活化顯著減弱(P<0.05). 結(jié)論：1.