豬肝微粒體細(xì)胞色素P450酶系的初步研究.pdf

1、目前肝微粒體水平的藥物代謝相互作用研究日趨增多，但用食品動(dòng)物豬肝微粒體進(jìn)行藥物代謝研究在國(guó)內(nèi)尚未見報(bào)道。本科題研究了不同年齡和性別豬肝CYP450酶系的檢測(cè)方法、四種臨床常用藥物對(duì)豬肝CYP450酶系的作用和探針?biāo)幬锓ㄔu(píng)價(jià)新獸藥氟尼辛葡甲銨對(duì)豬肝CYP450酶系的影響。具體研究?jī)?nèi)容如下： 1．用生物化學(xué)法和紫外分光光度法檢測(cè)豬肝微粒體蛋白含量和P450酶系活性。 取新鮮豬肝樣品勻漿，差速離心法制備肝微粒體，Bradfor

2、d法測(cè)定蛋白濃度，分光光度計(jì)法檢測(cè)6種肝細(xì)胞色素P450酶含量及活性。測(cè)定一月齡至八月齡不同性別的豬，肝微粒體蛋白含量、CYP450含量、CYPb5含量、NADPH-細(xì)胞色素C還原酶活性、氨基比林-N-脫甲基酶活性、紅霉素-N-脫甲基酶活性和苯胺-4-羥化酶活性。結(jié)果表明，豬一到八月齡肝微粒體蛋白含量變化范圍為6.646±0.457-13.596±1.077mg／ml，細(xì)胞色素P450含量變化范圍為0.270±0.044-0.587±0

3、.043 nmol／mg protein，細(xì)胞色素b5含量變化范圍為0.105±0.019-0.251±0.018 nmol／mg protein，NADPH-細(xì)胞色素C還原酶活性變化范圍為1.632±0.255-3.043±0.229 nmol／min／mg protein，氨基比林-N-脫甲基酶(AND)活性變化范圍為0.625±0.071-2.990±0.144 nmol／min／mgprotein，紅霉素-N-脫甲基酶(ERND

4、)活性變化范圍為0.562±0.095-2.540±0.177nmol／min／mg protein，苯胺-4-羥化酶(AH)活性變化范圍為0.090±0.016-0.231±0.021nmol／min／mg protein。建立的豬P450酶系檢測(cè)方法靈敏可靠，簡(jiǎn)單易行，重復(fù)性較好。豬肝微粒體蛋白含量和P450酶系活性隨著年齡增長(zhǎng)，含量增加，活性增強(qiáng)。同時(shí)肝微粒體蛋白含量、CYP450含量和紅霉素-N-脫甲基酶活性呈現(xiàn)有一定的性別差異

5、。 2．幾種臨床常用藥物對(duì)豬肝微粒體細(xì)胞色素P450酶系的影響。 四種藥物紅霉素、環(huán)丙沙星、地塞米松和乙醇，每天按正常治療劑量的5倍進(jìn)行肌肉注射，連續(xù)給藥10天。差速離心法制備豬肝微粒體，Bradford法測(cè)定蛋白濃度，分光光度法檢測(cè)6種肝細(xì)胞色素P450酶含量及活性，結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析處理。研究表明，四種藥物(除環(huán)丙沙星外)對(duì)P450酶的總活性均產(chǎn)生顯著影響，同時(shí)地塞米松組的微粒體蛋白含量和紅霉素-N-脫甲基酶活性，乙

6、醇組的苯胺-4-羥化酶活性和紅霉素組的紅霉素-N-脫甲基酶活性，與對(duì)照組相比均差異顯著。說明環(huán)丙沙星和紅霉素對(duì)豬肝細(xì)胞色素P450酶系有選擇性抑制作用，而地塞米松和乙醇對(duì)其起選擇性誘導(dǎo)效應(yīng)。 3．用Cocktail探針?biāo)幬锓ㄑ芯糠嵝疗霞卒@對(duì)豬肝細(xì)胞色素P450酶系的影響。 將12頭健康豬隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組6只，公母各半。實(shí)驗(yàn)組每天肌肉注射氟尼辛葡甲銨一次，劑量為國(guó)外豬病臨床單次治療量的5倍。對(duì)照組給予相同體積