外源性雌二醇對(duì)去勢(shì)雌性Wistar大鼠晶狀體上皮ERα、ERβ和Survivin表達(dá)的影響.pdf

1、目的:白內(nèi)障是各種原因引起的晶狀體的混濁。白內(nèi)障一直是公認(rèn)的首要致盲眼病,我國(guó)目前盲人中約有半數(shù)是白內(nèi)障引起的。白內(nèi)障是世界范圍內(nèi)的嚴(yán)重公共衛(wèi)生、社會(huì)和經(jīng)濟(jì)問題,是防盲治盲工作最優(yōu)先考慮的眼病。
　　 導(dǎo)致白內(nèi)障的因素多種多樣,例如,老化、遺傳、代謝異常、外傷、輻射、中毒和局部營(yíng)養(yǎng)障礙等。這些因素可引起晶狀體上皮細(xì)胞及囊膜損傷,滲透性增加,喪失屏障作用,晶狀體蛋白變性,纖維結(jié)構(gòu)改變,形成混濁。近些年,許多大型流行病學(xué)調(diào)查均發(fā)現(xiàn)雌

2、激素可保護(hù)晶狀體透明性,預(yù)防晶狀體混濁,對(duì)晶狀體有一定的保護(hù)作用。但雌激素抑制白內(nèi)障發(fā)生的機(jī)制尚不十分清楚。實(shí)驗(yàn)研究初步表明雌激素可能通過抗氧化損傷、維持細(xì)胞膜正常功能、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)介導(dǎo)、雌激素受體(estrogen receptor,ER)、凋亡等途徑發(fā)揮作用。對(duì)雌激素抑制白內(nèi)障機(jī)制的進(jìn)一步研究將有助于從新的角度揭示白內(nèi)障形成的深層次機(jī)制,為防治白內(nèi)障提供新的手

3、段,具有重要的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。
　　 本實(shí)驗(yàn)把成年去勢(shì)雌性Wistar大鼠隨機(jī)分組,分別通過點(diǎn)眼或注射的方法給予不同劑量的雌二醇(estradiol,E2),觀察其對(duì)晶狀體的透明性,光鏡下的形態(tài)和上皮細(xì)胞雌激素受體Erα、Erβ及凋亡相關(guān)基因Survivin表達(dá)的影響,發(fā)現(xiàn)雌二醇不同劑量和不同給藥途徑之間對(duì)晶狀體性狀和基因表達(dá)影響的差別,為探索雌二醇抑制白內(nèi)障的機(jī)制提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:
　　

4、 將60只清潔級(jí)健康成年雌性性成熟Wistar大鼠隨機(jī)分為6組:
　　 A組.正常對(duì)照組(給予假手術(shù),不給予雌二醇干預(yù))
　　 B組.去勢(shì)組(給予雙側(cè)卵巢切除,不給予雌二醇干預(yù))
　　 C組.去勢(shì)+低濃度E2點(diǎn)眼組(雙側(cè)卵巢切除后,給予苯甲酸雌二醇注射液50％稀釋液點(diǎn)眼,每日4次)
　　 D組.去勢(shì)+高濃度E2點(diǎn)眼組(雙側(cè)卵巢切除后,給予苯甲酸雌二醇注射液原液點(diǎn)眼,每日4次)
　　 E組.去勢(shì)+低

5、劑量E2注射組(雙側(cè)卵巢切除后,給予苯甲酸雌二醇注射液0.200mg.Kg-1.次-1肌肉注射,每3天一次)
　　 F組.去勢(shì)+高劑量E2注射組(雙側(cè)卵巢切除后,給予苯甲酸雌二醇注射液0.400mg.Kg-1.次-1肌肉注射,每3天一次)
　　 術(shù)前、術(shù)后及給藥后每周肉眼和裂隙燈顯微鏡觀察各組大鼠晶狀體變化。
　　 觀察6周后用放免法檢測(cè)血清中雌二醇濃度并處死大鼠,取其晶狀體分別進(jìn)行光鏡下組織細(xì)胞的形態(tài)觀察,免疫

6、組化SP法觀察雌激素受體Erα、Erα及凋亡相關(guān)基因Survivin在晶狀體上皮細(xì)胞的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用((-X)±S)表示,應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。
　　 結(jié)果:
　　 1、肉眼及裂隙燈顯微鏡下觀察,各組大鼠晶狀體均未出現(xiàn)空泡、小水裂以及前囊點(diǎn)狀混濁等改變。
　　 2、光鏡下,各組大鼠晶狀體囊膜均勻連續(xù),上皮細(xì)胞排列緊密,晶狀體纖維均未出現(xiàn)空泡、小水裂等改變。
　　 3、給藥6周后,去勢(shì)

7、+低濃度E2點(diǎn)眼組(C組)、去勢(shì)+高濃度E2點(diǎn)眼組(D組)與去勢(shì)組(B組)無差別(P＞0.05)。去勢(shì)+低劑量E2注射組(E組)和去勢(shì)+高劑量E2注射組(F組)血清雌二醇平均水平明顯高于B組(P＜0.01)。
　　 4、去勢(shì)組(B組)的Erα、Erβ免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞率(rate)及OD值較正常對(duì)照組(A組)明顯下降(P＜0.01)。去勢(shì)+低濃度E2點(diǎn)眼組(C組)、去勢(shì)+高濃度E2點(diǎn)眼組(D組)和去勢(shì)+高劑量E2注射組(F組)Er

8、α、Erβ免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)較去勢(shì)組(B組)明顯增高(P＜0.01)。去勢(shì)+低劑量E2注射組(E組)Erα、Erβ免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)較去勢(shì)+高劑量E2注射組(F組)下降(P＜0.01)。去勢(shì)+低濃度E2點(diǎn)眼組(C組)、去勢(shì)+高濃度E2點(diǎn)眼組(D組)和去勢(shì)+高劑量E2注射組(F組)間無明顯差別(P＞0.05)。
　　 5、Survivin在正常對(duì)照組(A組)、去勢(shì)組(B組)、去勢(shì)+低濃度E2點(diǎn)眼組(C組)和去勢(shì)+低劑量E2

9、注射組(E組)未見表達(dá)。去勢(shì)+高濃度E2點(diǎn)眼組(D組)和去勢(shì)+高劑量E2注射組(F組)可見晶狀體上皮細(xì)胞Survivin陽(yáng)性表達(dá)。
　　 結(jié)論:
　　 1.晶狀體上皮細(xì)胞Erα和Erβ的表達(dá)水平與體內(nèi)雌激素的水平有關(guān)。雌激素對(duì)晶狀體的保護(hù)作用是通過雌激素受體產(chǎn)生。
　　 2.晶狀體上皮細(xì)胞Survivin的表達(dá)水平由體內(nèi)高水平的外源性雌激素引起。雌激素具有誘導(dǎo)Survivin表達(dá)的作用。
　　 3.雌激素