雌性大鼠骨髓干細胞離體從頭合成雌二醇的研究.pdf

1、目的:
　　 研究雌性大鼠骨髓干細胞(female bone marrow stem cells,FBMSCs)在含10％胎牛血清的高糖DMEM離體培養(yǎng)條件下細胞形態(tài)的變化,檢測能否分化為產(chǎn)生雌二醇(estradiol,E2)及表達芳香化酶(aromatase,P450arom)的性激素生成細胞,為卵巢早衰、老年人骨質(zhì)疏松癥等疾病的治療提供新的可能途徑。
　　 方法:
　　 全骨髓貼壁法分離成年雌性SD大鼠的骨髓

2、干細胞,用含10％胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)增殖,傳代至第3代,加或不加全反式視黃酸(all-trans retinoic acid,ATRA)誘導分化,分為對照組(不加ATRA)和ATRA組(加ATRA10-5mol/L),觀察兩組細胞的形態(tài)學變化；放射免疫法(radioimmunoassay,RIA)/酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測兩組細胞培養(yǎng)液中E2、睪酮(te

3、stosterone,T)/雄烯二酮(androstenedione,ASD)的濃度；RT-PCR檢測兩組細胞中芳香化酶基因CYP19 mRNA的表達和FSHR mRNA的表達；免疫細胞化學檢測兩組細胞中芳香化酶蛋白的表達情況。
　　 結(jié)果:
　　 1.離體培養(yǎng)的第3代雌性大鼠骨髓干細胞,主要表現(xiàn)為大小均一、梭形的貼壁細胞。
　　 2.DMEM高糖培養(yǎng)基加胎牛血清培養(yǎng)第3代雌性大鼠骨髓干細胞,RT-PCR示對照組

4、和ATRA組從培養(yǎng)第1天開始均表達合成雌二醇的關(guān)鍵酶芳香化酶CYP19 mRNA和顆粒細胞標志基因FSHR mRNA,免疫細胞化學示兩組細胞從培養(yǎng)第2天到第4天都有芳香化酶蛋白的表達,陽性細胞呈簇狀分布,形態(tài)呈多角形或梭形,細胞核呈卵圓形,染深藍色。從培養(yǎng)1天開始在兩組細胞培養(yǎng)液中都檢測到較高水平的E2。
　　 3.對照組和ATRA組都能產(chǎn)生T和ASD,提示雌性大鼠骨髓干細胞在離體培養(yǎng)條件下能從頭合成E2。
　　 結(jié)論: