紫杉醇對人甲狀腺未分化癌細胞體外作用的實驗研究.pdf

1、本文旨在觀察不同濃度的紫杉醇對人甲狀腺未分化癌細胞：DRO生長的影響。研究紫杉醇能否阻滯細胞周期及誘導細胞凋亡。通過測定VEGF、bcl-2及bax在紫杉醇作用前后的變化，探討紫杉醇治療甲狀腺未分化癌的可能的分子機制。 方法： 1．細胞培養(yǎng)人甲狀腺未分化癌DRO細胞株，培養(yǎng)于含有10％胎牛血清，1×10<'5>U/L青霉素和鏈霉素、0.1 mmol/L MEM非必需氧基酸、1 mmol/L丙酮酸鈉的培養(yǎng)基中，置37℃、5

2、％CO<,2>培養(yǎng)箱培養(yǎng)，2～3天換液1次。用0.25％胰酶常規(guī)消化傳代，取對數(shù)生長期細胞進行實驗。 2．細胞增殖抑制實驗采用MTT法，檢測經(jīng)不同濃度的紫杉醇溶液(濃度分別為0、6.25、12.5、25、50、100μg/L，每個濃度設3個復孔，0μg/L紫杉醇為對照組)，分別培養(yǎng)24、48、72小時，在酶標儀492 nm波長處讀取吸光度A值。存活率(％)=實驗組A值/對照組A值×100％，抑制率(％)=(1-存活率)×100％

3、。作圖法得出半數(shù)抑制濃度：IC<,50>。 3．細胞周期和細胞凋亡率的測定采用流式細胞儀技術，0μg/L(對照組)，6.25μg/L(實驗組)紫杉醇分別作用DRO細胞24、48、72小時，在FACSCalibur雙激光流式細胞儀上檢測細胞周期和細胞凋亡率的變化。 4．采用RT-PCR方法測定經(jīng)0μg/L(對照組)、6.25μg/L(實驗組)紫杉醇作用48小時后DRO細胞VEGF mRNA、bcl-2mRNA及baxmRNA表達的

4、變化。 結果： 1．紫杉醇對細胞生長的影響。不同濃度紫杉醇與DRO細胞共同培養(yǎng)后，細胞生長受到抑制，并呈劑量、時間效應關系，72小時的IC<,50>為10μg/L。 2．紫杉醇對細胞周期和細胞凋亡的影響。實驗組紫杉醇作用于DRO細胞可將細胞周期阻滯于G<,2>/M期，與對照組比較24小時即可檢測到明顯的G<,2>/M期阻滯，48、72小時后紫杉醇G<,2>/M期阻滯作用逐漸減退；紫杉醇能夠誘導細胞凋亡，G<,2>

5、/M期阻滯作用后，流式細胞儀可檢測到明顯的凋亡峰，48小時凋亡達高峰，凋亡率為32.76％±1.54％，以后漸降低。 3．VEGF mRNA、bcl-2 mRNA及bax mRNA的表達變化VEGF mRNA在紫杉醇作用后表達減低，bax mRNA在紫杉醇作用后表達增強，而bcl-2 mRNA在作用前后表達無明顯變化。 結論： 1．紫杉醇在體外具有抑制人甲狀腺未分化癌DRO細胞增殖的作用，這種作用與劑量、時間呈正