胰島素抵抗大鼠TAU蛋白過(guò)度磷酸化的研究.pdf

1、目的:
　　 建立胰島素抵抗大鼠模型，觀察大鼠空腹血糖、胰島素、胰島素抵抗程度等對(duì)大鼠海馬TAU蛋白過(guò)度磷酸化水平的表達(dá)，以及對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響，探討胰島素抵抗在AD發(fā)病機(jī)制中的可能作用，為阿爾茨海默病特別是早期的防治提供理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 健康雄性Wistar大鼠30只，一月齡，體重120-150g，隨機(jī)分成3組，正常對(duì)照組(NC)10只，普通飲食喂養(yǎng)；胰島素抵抗組(IR)10只，給予高脂高糖高蛋

2、白喂養(yǎng)，三個(gè)月后用葡萄糖氧化酶法檢測(cè)大鼠血漿血糖值，放免法檢測(cè)血漿胰島素，胰島素抵抗指數(shù)，與正常組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義即造模成功；癡呆組(AD)10只，給予高脂高糖高蛋白喂養(yǎng)，胰島素抵抗后經(jīng)腦立體定位法向側(cè)腦室注射鏈脲霉素(STZ)；同時(shí)，給予NC和IR組同樣劑量的檸檬酸緩沖液側(cè)腦室注射。術(shù)后21天檢測(cè)大鼠行為學(xué)變化，用Morris水迷宮試驗(yàn)檢測(cè)各組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力，免疫組化法檢測(cè)病理改變，Westernblotting分析TAU蛋白上部分

3、磷酸化位點(diǎn)(Ser199、Thr205、Thr212、Thr217、Ser396)表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:
　　 1.大鼠的一般研究資料顯示大鼠的空腹血糖、血漿胰島素、胰島素抵抗指數(shù)IR和AD組明顯高于NC組(P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明造模成功。
　　 2.大鼠學(xué)習(xí)記憶能力測(cè)試結(jié)果顯示：與NC組相比，IR、AD組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力顯著下降，其逃離水迷宮的時(shí)間明顯延長(zhǎng)(P<0.05)，組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

4、(P<0.05)。
　　 3.海馬CA1區(qū)TAU免疫組化陽(yáng)性細(xì)胞觀察，IR、AD組大鼠海馬CA1區(qū)有較多的TAU免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞，胞漿濃染，呈棕褐色，而NC組細(xì)胞染色較淺，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量較少；與對(duì)照組相比，細(xì)胞平均灰度值增加，P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 4.大鼠海馬CA1區(qū)磷酸化TAU免疫印跡檢測(cè)，可見(jiàn)NC組條帶細(xì)于IR、AD組。利用圖像分析軟件對(duì)印跡進(jìn)行定量分析，與對(duì)照組比較，NC灰度值明顯降低，P<0.05

5、，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:
　　 1.側(cè)腦室內(nèi)小劑量STZ注射可以模擬AD的學(xué)習(xí)記憶障礙、TAU蛋白過(guò)度表達(dá)等行為學(xué)和病理學(xué)方面的特征，成功建立了AD動(dòng)物模型。
　　 2.胰島素抵抗大鼠腦內(nèi)呈Alzheimer病變說(shuō)明胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)障礙可能影響大鼠認(rèn)知、記憶等高級(jí)大腦功能。
　　 3.大鼠海馬CA1區(qū)TAU蛋白部分位點(diǎn)過(guò)度磷酸化表達(dá)增加，說(shuō)明IR可能參與調(diào)節(jié)神經(jīng)纖維纏結(jié)的主要成分TAU蛋白的過(guò)度磷