TLR4在AngII所致高血壓小鼠心血管重構(gòu)中的作用.pdf

1、目的：探討TLR4在血管緊張素Ⅱ所致高血壓小鼠心血管重構(gòu)中的作用。
　　 方法：將野生型的C57小鼠分為3組，空白對(duì)照組（灌注乙酸），血管緊張素Ⅱ組（1500ng/kg*min），TLR4組（灌注血管緊張素Ⅱ同時(shí)尾靜脈注射TLR4中和抗體）。血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡAngⅡ)灌注7天，于灌泵前2天至灌泵后7天小鼠尾靜脈注射TLR4（Toll-likereceptor4）中和抗體，小鼠尾動(dòng)脈套法測(cè)血壓，小鼠心動(dòng)超聲圖

2、觀察小鼠的心臟結(jié)構(gòu)和功能變化。RT-PCR檢測(cè)Collagenl，α-SMA，TGF-βmRNA的表達(dá)水平，免疫組化CollagenI，α-SMA，TGF-β染色，Masson染色檢測(cè)心臟纖維化。免疫組化檢測(cè)胸主動(dòng)脈內(nèi)皮素-1（ET-1）表達(dá)情況，觀察血管內(nèi)皮收縮功能的變化，平滑肌α肌動(dòng)蛋白(α-SMA)，核增殖抗原(PCNA)免疫組化染色觀察血管平滑肌增殖和表型的轉(zhuǎn)化情況。HE染色，免疫組化mac-2染色觀察心臟組織中炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)，

3、免疫組化和RT-PCR檢測(cè)炎性因子白介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)，單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MonocyteChemoattractantproteinMCP-1)，IL-6(interleukin-6，IL-6)的表達(dá)。用免疫組化方法檢測(cè)單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)，細(xì)胞間粘附分子（ICAM-1）在血管壁的表達(dá)。同時(shí)流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)檢測(cè)T細(xì)胞表面早期活化分子CD69的表達(dá)。
　　 結(jié)果：(1)血管緊張

4、素Ⅱ微量泵灌注后小鼠血壓升高，心肌細(xì)胞，血管內(nèi)皮細(xì)胞TLR4的表達(dá)上調(diào)。(2)注射TLR中和抗體后，小鼠心臟超聲舒張期左室壁厚度(PWTD)，收縮末期左室壁厚度(PWTD)減小，收縮末期左室容量(LVVol;S)，舒張木期左室容量(LVVol;d)，收縮期左室內(nèi)徑(LVESD)，舒張期左室內(nèi)徑(LVEDD)增加(p＜0.05)。注射TLR4中和抗體后，抑制了血管緊張素Ⅱ灌注后心臟代償性的收縮增強(qiáng)，射血分?jǐn)?shù)(EF％)，左室短軸縮短率(FS

5、%)降低，且接近空白對(duì)照組。心肌組織Mac-2陽(yáng)性炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)減少，炎癥介質(zhì)IL-1β，MCP-1，IL-6表達(dá)水平明顯降低。TGF-β表達(dá)下降，α-SMA陽(yáng)性肌成纖維細(xì)胞數(shù)目減少，CollagenI表達(dá)下降，小鼠心肌間質(zhì)和血管周圍纖維化減輕。(3)注射TLR4中和抗體后，小鼠血壓升高，但始終低于ANGⅡ灌注組。ET-1表達(dá)下降。血管平滑肌PCNA表達(dá)下降，α-SMA表達(dá)上升，同時(shí)發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)皮ICAM-1，血管中膜和外膜MCP-1表達(dá)