川芎嗪對C5b-9誘導(dǎo)足細(xì)胞損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的:觀察川芎嗪對膜攻擊復(fù)合物C5b-9介導(dǎo)的足細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。
　　方法:培養(yǎng)小鼠足細(xì)胞系MPC5,33℃、γ干擾素存在條件下誘導(dǎo)其增殖,37℃、無γ干擾素條件下培養(yǎng)14天獲得分化表型。以純化的人補(bǔ)體C5b6和正常人血清提供C7～C9體外組裝膜攻擊復(fù)合物C5b-9,作用于培養(yǎng)足細(xì)胞,建立足細(xì)胞亞溶破模型。免疫熒光染色分析膜攻擊復(fù)合物 C5b-9對足細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白F-actin表達(dá)的影響以及C5b-9對足細(xì)胞裂孔隔膜蛋白ne

2、phrin表達(dá)和分布的影響。流式細(xì)胞儀分析熒光探針DCFH-DA標(biāo)記的細(xì)胞內(nèi)ROS。MTT法檢測川芎嗪對足細(xì)胞增殖的影響,確定川芎嗪干預(yù)劑量,觀察川芎嗪對上述損傷的干預(yù)作用。
　　結(jié)果:LDH釋放實(shí)驗(yàn)和免疫熒光染色顯示足細(xì)胞亞溶破模型成功建立。亞溶解劑量的C5b-9可呈時間依賴性地破壞足細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)。C5b-9誘導(dǎo)足細(xì)胞內(nèi) ROS的產(chǎn)生明顯增加。延長C5b-9作用時間,有使nephrin表達(dá)重分布的趨勢。川芎嗪干預(yù)足細(xì)胞能明顯減少