2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、植物萜類是植物揮發(fā)物的主要組成成分,主要有由半萜、單萜、倍半萜、二萜、四萜等組成。它們?cè)谥参锵銡饨M成、昆蟲誘導(dǎo)、植物防御、生長(zhǎng)調(diào)控等方面具有重要作用。Α-法尼烯是存在于多種植物的葉片、花和果實(shí)中的一種倍半萜類揮發(fā)性有機(jī)化合物,已知與植物的抗冷性、昆蟲的誘導(dǎo)及冷藏蘋果和梨果實(shí)重大的生理病害-虎皮病的發(fā)生有關(guān)。Α-法尼烯合成酶(AFS)是調(diào)控α-法尼烯合成的關(guān)鍵酶、最終酶,它催化FPP轉(zhuǎn)變?yōu)棣?法尼烯。近年來(lái),通過外源萜類合酶在植物體的表達(dá)

2、來(lái)研究萜類合成以及異戊二烯途徑已經(jīng)成為國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。
   根據(jù)α-法尼烯合成酶基因全長(zhǎng)序列設(shè)計(jì)特定引物,構(gòu)建正義表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化擬南芥,研究α-法尼烯合酶的表達(dá)情況;利用多種蛋白質(zhì)預(yù)測(cè)軟件和原生質(zhì)體定位研究α-法尼烯合酶在外源植物體中的定位,探討功能發(fā)揮位點(diǎn)和α-法尼烯合酶參與的途徑;檢測(cè)轉(zhuǎn)基因擬南芥、煙草次生代謝物的含量變化,研究α-法尼烯合酶的表達(dá)對(duì)擬南芥、煙草異戊二烯途徑的影響。主要結(jié)果如下:
   (1)構(gòu)建

3、了pBI-AFS正義表達(dá)載體,并轉(zhuǎn)化擬南芥,得到轉(zhuǎn)AFS基因的擬南芥植株。
   (2)利用RT-PCR的方法和western雜交分析,檢測(cè)α-法尼烯合成酶在轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平成功表達(dá)。
   (3)利用多種蛋白質(zhì)蛋白結(jié)構(gòu)分析和定位預(yù)測(cè)軟件(SignalP、TMHMM、TargetP、CLC ProteinWorkbench),對(duì)AFS蛋白進(jìn)行蛋白結(jié)構(gòu)分析和信號(hào)肽定位預(yù)測(cè),發(fā)現(xiàn)α-法尼烯合成酶不具有跨膜區(qū)域和信號(hào)肽,該酶

4、很可能定位在細(xì)胞質(zhì)中。
   (4)通過克隆青香蕉蘋果的α-法尼烯合成酶基因(AFS)全長(zhǎng),構(gòu)建pBI-AFS-GFP真核表達(dá)載體,制備擬南芥原生質(zhì)體,利用GFP融合蛋白的亞細(xì)胞定位確定α-法尼烯合酶在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)。
   (5)純化轉(zhuǎn)基因煙草品系,提取轉(zhuǎn)基因煙草T2代基因組,PCR篩選得到純合的T2代轉(zhuǎn)基因煙草。
   (6)GC/MS檢測(cè)揮發(fā)性萜類、煙草甾體物質(zhì)的含量組成,發(fā)現(xiàn)與野生型相比,轉(zhuǎn)基因煙草中單萜、

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