IL-12對肥大細(xì)胞蛋白酶激活受體表達(dá)和介質(zhì)分泌的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、蛋白酶激活受體( proteinase activated receptors或 protease activated receptors, PARs),白細(xì)胞介素(interleukin, IL)-4,IL-6參與過敏反應(yīng)的發(fā)生, IL-12參與后天獲得性免疫反應(yīng)。然而IL-12對酶引起的肥大細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響,細(xì)胞因子對肥大細(xì)胞PAR表達(dá)的影響,Th1類細(xì)胞因子IL-12對肥大細(xì)胞Th2類細(xì)胞因子分泌的影響及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路還不甚

2、清楚。因此本研究探討IL-12對肥大細(xì)胞 PARs表達(dá)和IL-4,IL-6分泌以及組胺釋放的影響,并探討可能的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。
  肥大細(xì)胞激發(fā)后,收集各時間點(diǎn)的細(xì)胞和上清。細(xì)胞處理后采用流式細(xì)胞術(shù)和實(shí)時定量PCR的方法在蛋白水平和mRNA水平檢測PAR-1,PAR-2,PAR-3和PAR-4表達(dá)情況,用細(xì)胞激發(fā)信號ELISA(cellular activation of signaling ELISA,CASE)方法檢測信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通

3、路蛋白Akt,ERK,p38和STAT3磷酸化情況;上清用ELISA方法檢測IL-4,IL-6和組胺水平。
  結(jié)果顯示:肥大細(xì)胞 P815在蛋白水平和mRNA水平表達(dá) PAR-1,PAR-2, PAR-3和PAR-4。IL-12下調(diào)PAR-2蛋白和mRNA在肥大細(xì)胞P815上的表達(dá);IL-12上調(diào)PAR-4蛋白和mRNA在肥大細(xì)胞P815上的表達(dá);IL-12上調(diào)PAR-1和PAR-3 mRNA在肥大細(xì)胞P815的表達(dá);以低濃度I

4、L-12(1 ng/ml)預(yù)處理肥大細(xì)胞60分鐘后,胰蛋白酶和類胰蛋白酶引起的PAR-2蛋白和mRNA在肥大細(xì)胞P815上的表達(dá)增強(qiáng);IL-12抗體的應(yīng)用可以阻斷IL-12對PAR表達(dá)的上調(diào)作用。 IL-12以濃度依賴的方式促進(jìn)肥大細(xì)胞P815分泌IL-4;低濃度IL-12(1ng/ml)預(yù)處理P815細(xì)胞60分鐘后,胰蛋白酶和類胰蛋白酶引起的IL-4分泌被抑制;PAR-2拮抗肽FSLLRY-NH2的應(yīng)用能阻斷胰蛋白酶和類胰蛋白酶引起的

5、IL-4分泌,但對IL-12引起的IL-4分泌無影響;IL-12對肥大細(xì)胞IL-6分泌和組胺釋放無明顯影響。應(yīng)用PD98059, U0126和LY294002可以阻斷IL-12引起的肥大細(xì)胞 IL-4分泌并抑制IL-12引起的ERK和Akt磷酸化。
  總之,IL-12能夠調(diào)節(jié)肥大細(xì)胞PARs表達(dá)并刺激肥大細(xì)胞分泌IL-4。IL-12引起肥大細(xì)胞P815分泌IL-4很可能是通過激活 Akt和ERK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路實(shí)現(xiàn)的,而胰蛋白酶和類

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