阿司匹林與煙草提取物對食管鱗癌細(xì)胞株cyclinD-,1-表達(dá)及對細(xì)胞周期的影響.pdf

1、首都醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文阿司匹林與煙草提取物對食管鱗癌細(xì)胞株cyclinD表達(dá)及對細(xì)胞周期的影響姓名：胡海一申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)（消化系?。┲笇?dǎo)教師：張澍田20070301首都醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文阿司匹林與煙草提取物對食管鱗癌細(xì)胞株c y c | ．n D ，表達(dá)及對細(xì)胞周期的影響摘要目的探討細(xì)胞周期蛋白D I ( c y c l i n D l ) 在食管鱗癌細(xì)胞株E C l 0 9 的表達(dá)情況，檢測C O X - 2 抑制

2、劑阿司匹林及煙草提取物作用前后c y c l i n D l 蛋白水平及細(xì)胞周期的變化。方法應(yīng)用不同濃度的阿司匹林及煙草提取物C E ( c h l o r o f o r m e x t r a c t ，C E ) 作用于E C l 0 9 細(xì)胞4 8 小時(shí)后，采用M T T 法檢測細(xì)胞活性變化及活細(xì)胞數(shù)目；應(yīng)用R T - P C R 方法檢測E C I I Y ) 細(xì)胞c y c l i n D l 基因表達(dá)水平；應(yīng)用W e s

3、t e r n b l o t 方法檢測作用前后e y c l i n D l 蛋白表達(dá)水平的變化；應(yīng)用P I 單染流式細(xì)胞儀( f l o we y t o m e t r y , F C M ) 技術(shù)檢測不同濃度阿司匹林及C E 作用前后細(xì)胞周期的變化。噻唑藍(lán)法[ M T T , 3 - ( 4 ，5 ·d i m e t h y l t h i a z o l ?2y 02 ，5 一d i p h c n y l t e

4、 t r a z o l i u mb r o m i d e ] ：將細(xì)胞種植于9 6 孔板培養(yǎng)2 4 小時(shí)，然后加入不同濃度的阿司匹林及煙草提取物C E ，孵育4 8 小時(shí)，最后加入噻唑藍(lán)并進(jìn)行吸光度檢測。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法( R T - P C R ) ．“ 從細(xì)胞提取總R N A ，并用2 腭總R N A逆轉(zhuǎn)錄成e D N A 。然后將2m e D N A 加入P C R 擴(kuò)增體系進(jìn)行擴(kuò)增，最后將P C R產(chǎn)物在瓊脂糖凝膠中電