轉(zhuǎn)染RIZ1基因后食管鱗癌細胞株基因表達譜的變化.pdf

1、目的:
　　觀察轉(zhuǎn)染視網(wǎng)膜母細胞瘤蛋白結(jié)合鋅指結(jié)構(gòu)基因1（RIZ1基因）后，食管鱗狀上皮細胞癌細胞株TE13基因表達譜的改變，探討RIZ1基因在食管鱗癌中可能的作用機制。
　　方法:
　　1.培養(yǎng)食管鱗癌TE13細胞株，1∶10傳代后培養(yǎng)至對數(shù)生長期，脂質(zhì)體法分別轉(zhuǎn)染pcDNA3.1(+)和pcDNA3.1(+)/RIZ1真核表達載體。
　　2.確認轉(zhuǎn)染成功后，應用Agilent人類全基因表達譜基因芯片篩選轉(zhuǎn)染前

2、后的差異基因（差異倍數(shù)foldchange≥2或≤0.5），對差異基因進行基因本體論、通路分析。
　　3.隨機選取部分差異基因，用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(reverse transcriptionpolymerase chain reaction，RT-PCR)法檢驗轉(zhuǎn)染RIZ1基因后，TE13細胞株中相應mRNA表達水平，驗證與基因芯片結(jié)果的一致性。
　　結(jié)果:
　　RIZ1基因在TE13細胞株中轉(zhuǎn)染成功，基因芯片結(jié)果

3、顯示RIZ1基因轉(zhuǎn)染食管鱗癌細胞株TE13后引起的差異基因共2123個，其中上調(diào)960個，下調(diào)1163個，RT-PCR法驗證差異基因mRNA表達水平與芯片結(jié)果一致率為88.9％(8/9)。對差異基因功能進行分析顯示，差異基因主要與細胞發(fā)育、病毒復制的監(jiān)管、淋巴細胞共刺激、免疫系統(tǒng)發(fā)育等功能簇相關(guān)。差異基因的信號通路主要集中于細胞因子受體互相作用、轉(zhuǎn)化生長因子β信號途徑、促分裂素原活化蛋白激酶通路、血管內(nèi)皮生長因子信號通路等。