共載長春新堿和神經(jīng)酰胺的脂質體的抗肝癌作用研究.pdf

1、納米技術是化療領域的重大突破，也是當前的研究熱點，針對納米載體的修飾克服普通化療藥物細胞毒性強和體內(nèi)循環(huán)時間短的缺點。長春新堿是一種肝癌常用的化療藥物，它能夠抑制細胞自噬，損壞細胞的保護性自噬過程。Ceramide能夠引起線粒體性自噬，促進功能障礙的線粒體通過自噬降解，兩者聯(lián)用可以使細胞自噬阻斷，使細胞死亡。
　　本研究在體外對兩種游離藥物對自噬蛋白的影響進行了測定，發(fā)現(xiàn)VCR能夠抑制LC3和p62的表達，證明其抑制自噬過程的成熟

2、，而ceramide能夠使LC3表達增加，p62表達下降，說明可以誘導自噬過程的發(fā)生。利用兩種藥物在體外的聯(lián)合殺傷實驗結果，我們設計了脂質體配方。然后，利用乙醇注入法和pH梯度法實現(xiàn)了長春新堿和ceramide的共載，對制備的脂質體進行納米表征的測定，判斷脂質體穩(wěn)定性。體外細胞毒性實驗實驗發(fā)現(xiàn)納米藥物Lip-VCR-Cer及Lip-VCR對肝癌細胞的殺傷效果較游離VCR和游離VCR+ceramide的效果而言要弱。而對于不同處理時間的細

3、胞存活率，不存在統(tǒng)計學差異。與游離藥物不同，脂質體通過細胞內(nèi)吞作用進入細胞緩慢釋放發(fā)揮作用，到達腫瘤細胞的VCR和ceramide濃度增加，使藥物的利用率上升，增加對細胞的作用，而游離細胞對細胞的作用快速而短暫，細胞毒性作用迅速體現(xiàn)。
　　Lip-VCR-Cer的殺傷作用大于Lip-VCR，游離VCR+Ceramide的殺傷作用大于游離VCR，這可能與Ceramide對細胞發(fā)揮的作用有關，Ceramide在細胞內(nèi)能夠通過特定信號通

4、路誘導自噬，引起自噬蛋白LC3的表達增加，自噬流標志蛋白p62表達降低，發(fā)揮誘導細胞自噬的保護性作用。Ceramide通過不同的機制誘導保護性自噬和致死性自噬，保護性自噬實質為線粒體自噬。線粒體能夠通過某種自噬的形式選擇性降解功能受損的線粒體，避免功能異常的線粒體產(chǎn)生活性氧物質增多，不利于細胞生長，這種保護性自噬使腫瘤細胞能夠適應內(nèi)外環(huán)境刺激，促進腫瘤的生長，而VCR的存在使其誘導的保護性作用抑制，使細胞不能適應環(huán)境刺激，發(fā)生死亡。這種

5、自噬誘導劑的存在使腫瘤細胞對化療藥敏感性增強，使VCR與Ceramide聯(lián)用產(chǎn)生了更強的殺傷效果。
　　結論:Lip-VCR-Cer與Lip-VCR在基本表征，體外釋放和體外細胞毒性方面不存在統(tǒng)計學意義的差異。在體外殺傷效果弱于游離VCR和游離VCR+ceramide的細胞殺傷效果，四種藥物處理組的殺傷效果VCR+Ceramide＞VCR＞Lip-VCR-Cer＞Lip-VCR。VCR與Ceramide聯(lián)用增強了細胞殺傷效果，這可