青蒿琥酯納米脂質(zhì)體抗肝癌作用及其線粒體途徑誘導(dǎo)凋亡機(jī)制的研究.pdf

1、目的:對比研究ART納米脂質(zhì)體與ART原料藥在體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞和人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型中的抗肝癌作用,及對凋亡基因表達(dá)的影響。為肝癌的臨床治療探索新的安全有效的藥物制劑。
　　方法:制備ART納米脂質(zhì)體;MTT法檢測其對體外肝癌細(xì)胞的增殖抑制作用;用Hoechst33258染色法觀察細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變;建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型,觀察ART納米脂質(zhì)體的抑瘤作用;應(yīng)用 RT-PCR法檢測藥物處理后細(xì)胞和組織中凋亡因子 Apaf

2、-1、caspase-9、caspase-3 mRNA的表達(dá);免疫組織化學(xué)法檢測凋亡因子caspase-3蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:MTT方法檢測 HepG2細(xì)胞的生長抑制情況,結(jié)果顯示ART原料藥和ART納米脂質(zhì)體對HepG2細(xì)胞的生長抑制作用呈劑量和時(shí)間依賴性,作用48h時(shí),ART原料藥組和ART納米脂質(zhì)體組隨藥物濃度的不斷增加(12.5、25、50、100、200μg/ml),細(xì)胞生長抑制率不斷增強(qiáng),當(dāng)藥物濃度為50μg/ml

3、時(shí),ART原料藥的抑制率為85％,ART納米脂質(zhì)體的抑制率為90%,而順鉑在50μg/ml時(shí)的抑制率為72%,72h后ART納米脂質(zhì)體組細(xì)胞生長抑制率明顯強(qiáng)于原料藥組,且差異顯著。ART納米脂質(zhì)體的 IC50為15.997μg/ml,ART原料藥的IC50為19.706μg/ml;對正常肝細(xì)胞L-o2細(xì)胞的作用,ART納米脂質(zhì)體的 IC50為100.226μg/ml, ART原料藥的 IC50為105.54μg/ml;Hoechst33

4、258染色HepG2細(xì)胞發(fā)生凋亡形態(tài)學(xué)改變;人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型,三個(gè)處理組瘤重分別為對照組0.859±0.207g,ART原料藥組為0.682±0.240g,ART納米脂質(zhì)體組0.578±0.185g。ART原料藥的抑瘤率為20.5%,ART納米脂質(zhì)體的抑瘤率為32.7%,ART脂質(zhì)體對腫瘤的抑制作用明顯高于ART原料藥;RT-PCR技術(shù)檢測細(xì)胞和組織中凋亡相關(guān)因子 mRNA表達(dá),ART納米脂質(zhì)體組與原料藥組的Apaf-1、cas