Survirin siRNA納米脂質(zhì)體抗肝癌活性研究.pdf

1、實驗?zāi)康?本研究主要探討體外survivin小分子干擾RNA(siRNA)對人肝癌細(xì)胞株MHCC-97H Survivin基因表達(dá)及其增殖和凋亡的影響。體內(nèi)研究Survivin siRNA對裸鼠肝癌種植瘤Survivin基因表達(dá)以及腫瘤生長的影響。
　　實驗方法:體外實驗通過設(shè)計、合成針對Survivin基因序列特異性siRNA，用脂質(zhì)體包裹轉(zhuǎn)染人肝癌細(xì)胞株MHCC-97H，實驗分為3組:Survivin siRNA轉(zhuǎn)染組（Sur

2、-siRNA組），無關(guān)siRNA轉(zhuǎn)染組(NC組)和無轉(zhuǎn)染組（正常對照組）。采用RT-PCR、Western blot技術(shù)檢測Survivin mRNA及蛋白表達(dá);噻唑藍(lán)(MTT)比色法檢測細(xì)胞增殖情況;分別以終濃度為12.5、25.0、50.0 nmol/L的siRNA作用于細(xì)胞后24 h，采用流式細(xì)胞儀AnnexinⅤ/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡。
　　體內(nèi)實驗通過肝癌細(xì)胞株構(gòu)建荷瘤鼠動物模型，將脂質(zhì)體包裹的SurvivinsiRN

3、A經(jīng)靜脈注入裸鼠種植瘤體內(nèi)，以無關(guān)siRNA為對照組，觀察動物及瘤體的變化，RT-PCR檢測瘤組織survivin mRNA水平，Western blot檢測瘤組織survivin蛋白表達(dá)情況。
　　實驗結(jié)果:體外實驗結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染后48h，Sur-siRNA組、NC組、正常對照組Survivin mRNA表達(dá)水平分別為0.55±0.16、0.85±0.28、0.93±0.40，組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=414，P＜0.01）

4、。Sur-siRNA組最低，與NC組、正常對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=-20.56、-28.37，P均＜0.001）。siRNA轉(zhuǎn)染48h后，Si-survivin組、NC組、正常對照組Survivin蛋白的相對表達(dá)量分別為0.602±0.005、0.835±0.007、0.993±0.003，組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=238，P＜0.01）;Sur-siRNA組蛋白表達(dá)水平最低，與NC組、正常對照組差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(t=-

5、40.17、-66.03，P均＜0.001)。轉(zhuǎn)染后72 h和96 h，Si-survivin組細(xì)胞抑制率[（19.5±3.6）％、(12.0±0.9)％]顯著高于于NC組[（3.6±0.9）％、(-1.3±6.1)％]（t=36.18、42.53，P均＜0.05）。分別以終濃度為12.5、25.0、50.0 nmol/L的siRNA作用于細(xì)胞后24 h，12.5、25.0、50.0 nmol/LsiRNA組、NC組和正常對照組細(xì)胞凋亡

6、率[分別為（22.64±2.54）％、（35.37±3.28）％、（53.28±4.35）％、（8.77±1.25）％、（9.72±1.37）]比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=35.93，P＜0.01)，而且不同siRNA干擾濃度間凋亡細(xì)胞率兩兩比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=-29.73、-38.57，P均＜0.001)。
　　荷瘤鼠動物實驗發(fā)現(xiàn):Survivin-siRNA注射組(SU-Ⅳ組)在注射后10天腫瘤體積較對照組明顯縮小，差