茶溴香酰胺脂質體的制備和抗肺癌活性的研究.pdf

1、目的：茶氨酸具有降壓、鎮(zhèn)靜、提高機體免疫力、對某些抗癌藥物的生物調節(jié)作用、提高化療效果，降低化療副作用等多種藥理作用，與傳統(tǒng)化學藥物相比具有毒性低的特點。脂質體是一種靶向藥物載體，具有減少藥物的劑量和降低藥物的毒性的特點，本實驗室合成的茶氨酸衍生物茶溴香酰胺（TBrC），經過前期研究顯示了較高的抗癌活性，為更好地發(fā)揮其抗癌作用，增加藥物在體內外藥效，提高生物利用度，本課題制備了茶溴香酰胺脂質體（TBrC-L）和其與紫杉醇的復方脂質體（T

2、BrC+P-L），考察其制備方法、處方和工藝及穩(wěn)定性，以紫杉醇脂質體等為陽性對照，通過體外實驗，研究了制備的脂質體對人肺癌細胞生長和遷移的影響與其作用的分子機制。
　　方法：
　　1.建立TBrC-L和TBrC+P-L的HPLC含量測定方法；以包封率為指標，通過單因素實驗篩選TBrC-L和TBrC+P-L的制備方法并進行工藝優(yōu)化，確定最佳處方；對TBrC-L和TBrC+P-L進行初步穩(wěn)定性和質量研究。
　　2.使用MT

3、T法和流式細胞術分別檢測TBrC-L和TBrC+P-L對人肺癌A549細胞生長和凋亡的影響。
　　3.用Transwell chamber法觀察TBrC-L和TBrC+P-L對人肺癌A549細胞遷移的影響。
　　4.應用蛋白印跡技術檢測TBrC-L和TBrC+P-L對人肺癌A549細胞中與生長和遷移相關的蛋白的表達進行檢測，并探索其可能作用的分子機制。
　　結果：
　　1.采用薄膜-超聲分散法分別得到了TBrC-

4、L和TBrC+P-L，通過單因素試驗篩選TBrC-L的最優(yōu)處方是：磷脂與膽固醇的比為10:1，脂藥比為5:1，氯仿為10mL，生理鹽水為15mL；TBrC+P-L的最優(yōu)處方是：磷脂與膽固醇的比為10:1，茶溴香酰胺與紫杉醇的質量比為4:1，氯仿為10mL，生理鹽水為15mL。該工藝條件下，TBrC-L的平均包封率可達76.6％，TBrC+P-L中TBrC的包封率為64.5%，紫杉醇的包封率為42%，且粒徑分布均勻，批間差異較小。

5、　　2.MTT結果表明：16～250μM的TBrC-L和TBrC+P-L對人肺癌A549細胞的生長均表現(xiàn)出抑制作用，并呈現(xiàn)出顯著的劑量—時間依賴關系。流式細胞術分析顯示TBrC-L和TBrC+P-L可以促進人肺癌A549細胞發(fā)生凋亡。
　　3.Transwell chamber檢測結果表明：TBrC-L和TBrC+P-L可以降低人肺癌A549細胞的遷移能力。
　　4.Western blotting表明：TBrC-L和TBr

6、C+P-L能夠上調抑制生長和誘導凋亡的相關蛋白因子Bax、PARP-1和caspase-3的表達水平，下調促進生長和遷移以及抗凋亡的相關蛋白因子VEGFR1、Bcl-2、Akt、NF-κB蛋白的表達水平。
　　結論：TBrC-L和TBrC+P-L對人肺癌A549細胞的生長和遷移有顯著的抑制作用，并且TBrC+P-L的抑制作用更強；促進腫瘤細胞凋亡、抑制腫瘤細胞生長和遷移可能是其作用重要的分子機制，其中涉及到的蛋白因子包括Bcl-2