視網膜色素變性合并肢端病變一家系致病基因篩查.pdf

1、【目的】
　　 應用候選基因篩查、連鎖分析方法對一合并有肢端病變的視網膜色素變性家系進行致病基因排除定位。
　　 【材料和方法】
　　 1．通過家系調查收集家系臨床資料。
　　 2．抽取家系成員外周血并提取全血基因組DNA。
　　 3．查閱文獻及網絡數據庫，確定已知的發(fā)病率高的視網膜色素變性致病基因為候選基因。
　　 4．對于候選基因USH2A，RPGR，通過選取微衛(wèi)星標記，對已知遺傳狀態(tài)

2、的家系成員行聚丙烯酰胺凝膠電泳，銀染顯色后進行非參數連鎖分析。
　　 5．對于候選基因RHO、PRPF3、PRPF8、PRPF31、RDS、RP10、RPGR、RP1基因的突變熱點區(qū)域設計引物，將先證者基因組DNA進行PCR擴增后直接測序，通過與網絡數據庫進行比對，明確有無突變。
　　 【結果】
　　 家系臨床研究表明，YPH家系所患視網膜色素變性系遺傳性疾病，常染色體顯性遺傳可能性大。對于USH2A、RPGR做

3、的家系非參連鎖分析結果顯示，家系中患者與標記位點無連鎖不平衡現象，故可排除這兩個基因致病。對先證者的RHO、PRPF3，PRPF8、PRPF31、RDS，RP10、RPGR基因編碼區(qū)或突變熱點區(qū)域直接測序結果顯示，未發(fā)現致病性突變。
　　 先證者RP1基因編碼區(qū)有一雜合性突變導致RP1蛋白D998Y突變，經過生物信息學方法預測，這一突變是致病性突變。但是，對家系其他成員的篩查卻發(fā)現這一突變不與家系中患者共分離，故很可能不是YPH