腎臟缺血再灌注損傷過程中水通道蛋白1、2的表達變化.pdf

1、目的：腎臟作為一種高灌注器官，對缺血非常敏感，所以在休克復蘇、擠壓綜合征解壓及腎移植術后等很容易發(fā)生缺血再灌注損傷(ischemicalreperfusion injury，IRI)。腎IRI是缺血性急性腎功能衰竭(acute renalfailure，ARF)的重要損傷環(huán)節(jié)<'[1]>，也是腎移植中影響移植腎早期功能恢復及長期存活的主要因素<'[2]>。腎IRI損傷的病理生理機制非常復雜，目前對腎IRI病理生理機制的研究主要集中在活性

2、氧(ROS)、中性粒細胞、補體系統(tǒng)等方面，而對腎臟存在的水通道蛋白(AQPs)在這一病理生理條件下的作用認識不足。為此，本研究通過建立大鼠的腎臟IRI模型觀察其AQP-1、2的表達變化與腎功能變化的關系，以從新的角度探討腎臟IRI及ARF的發(fā)病機理。 方法：建立大鼠左側腎臟40分鐘缺血再灌注損傷模型。隨機將實驗動物分為對照和缺血再灌注1、2、3、5、7天組。術后留取大鼠尿液標本進行尿液檢測：并于上述不同時間點處死大鼠，留取血清標

3、本行腎功能檢測；留取腎臟標本應用HE染色于光鏡下觀察腎臟的病理形態(tài)學變化，應用半定量RT-PCR方法測定AQP-1、AQP-2 mRNA的表達水平變化，以及免疫組織化學染色及Western blot測定AQP-1、AQP-2蛋白表達水平的變化。 結果：1．尿液變化：(1)尿量變化：各對照組間，尿量變化無統(tǒng)計學意義(p>0.05)；缺血再灌注損傷組大鼠尿量較對照組逐漸增多，并于術后第3天達到最高(p<0.01)；以后逐漸減少，術后

4、第7天恢復正常(p>0.05)。(2)尿滲透壓變化：各對照組間，尿滲透壓變化無統(tǒng)計學意義(p>0.05)；缺血再灌注損傷組大鼠尿滲透壓較對照組逐漸降低，術后第3天達到最低(p<0.01)，以后逐漸增高，術后第7天恢復正常(p>0.05)。 2．腎功能的變化：各對照組間，腎功能變化無統(tǒng)計學意義(p>0.05)： 缺血再灌注組大鼠術后血肌苷、尿素氮較對照組逐漸升高，于術后第三天達到最高(p<0.01)，以后逐漸降低；術后第七

5、天恢復正常(p>0.05)。 3．腎組織學變化：術后HE染色可見缺血再灌注組大鼠的腎小管上皮細胞較對照組明顯腫脹壞死脫落。 4．AQP-1、AQP-2 mRNA表達變化：各對照組間，AQP-1、AQP-2mRNA表達變化無統(tǒng)計學意義(p>0.05)；缺血再灌注損傷組大鼠腎臟AQP-1、AQP-2 mRNA表達水平較對照組逐漸降低；AQP-1于術后第1天達到最低，以后又逐漸升高，于術后第5天恢復正常(p>0.05)；AQP-2于術

6、后第3天最低，以后逐漸增加于術后第7天恢復正常(p>0.05)。 5．免疫組織化學及Western blot檢測AQP-1、AQP-2的變化：各對照組間，AQP-1、AQP-2表達變化無統(tǒng)計學意義(p>0.05)；缺血再灌注組大鼠腎臟AQP-1的表達量較對照組逐漸減少，于術后第1天達到最低(p<0.01)，以后逐漸增高，于術后第5天恢復正常(p>0.05)：AQP-2的表達量較對照組逐漸減少，于術后第3天達到最低(p<0.01)

7、，以后逐漸增高，于術后第7天恢復正常(p>0.05)。 結論：1．實驗大鼠腎臟發(fā)生缺血再灌注損傷后，腎小管上皮細胞明顯腫脹、壞死脫落；24h尿量、血肌苷、尿素氮升高：尿滲透壓降低，提示缺血再灌注損傷是急性腎小管壞死及進一步導致急性腎功能衰竭的誘因之一。 2．實驗大鼠腎臟缺血再灌注損傷后出現(xiàn)尿量增多、尿滲透壓降低等癥狀的同時伴有AQP-1、AQP-2表達的減少，提示腎臟發(fā)生缺血再灌注損傷后腎小管上皮細胞AQP-1、AQP-