黃芪多糖對(duì)斷奶仔豬免疫調(diào)控作用及其機(jī)理.pdf

1、本論文通過(guò)三個(gè)在體動(dòng)物試驗(yàn)及一個(gè)體外細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)，系統(tǒng)地探討了黃芪多糖(APS)對(duì)斷奶仔豬免疫功能的調(diào)控作用及其機(jī)理。(1)首先研究了不同梯度的APS對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)和免疫功能的影響，確定了其適宜的添加劑量。試驗(yàn)選用144頭28±3d斷奶、體重為7.64±0.29kg的長(zhǎng)白×大白仔豬，隨機(jī)分為6個(gè)處理，分別飼喂含0、100、250、500、750、1,000mg/kgAPS的日糧；試驗(yàn)期21d，所有仔豬于14d肌肉注射1mg/kg體重卵清

2、白蛋白(OVA)以評(píng)價(jià)體液免疫功能，在21d試驗(yàn)結(jié)束之前采血測(cè)定淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率、血清OVA抗體、IgG以及細(xì)胞因子IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ含量。結(jié)果表明，APS能改善斷奶仔豬生長(zhǎng)速度，增強(qiáng)仔豬細(xì)胞免疫功能和Th1類細(xì)胞因子(IL-2、IFN-γ)的分泌量；通過(guò)broken-line和二次回歸分析，綜合考慮生長(zhǎng)性能和免疫功能，APS的添加量以500mg/kg為宜。(2)研究了APS對(duì)環(huán)磷酰胺(CY)免疫抑制斷奶仔豬生產(chǎn)性

3、能和免疫功能的影響，探討APS對(duì)斷奶仔豬免疫抑制是否具有逆轉(zhuǎn)作用。試驗(yàn)選用體重為10.85±0.54kg的長(zhǎng)白×大白仔豬，單個(gè)飼養(yǎng)于代謝籠中，采用2×2因子試驗(yàn)設(shè)計(jì)：日糧處理(0或500mg/kgAPS)和免疫狀態(tài)(注射CY或生理鹽水)。試驗(yàn)期21d，在試驗(yàn)的第7、14和21d，每日糧處理中一半的仔豬腹腔注射50mg/kgBW的CY以構(gòu)建免疫抑制模型，另一半注射等量的生理鹽水作為對(duì)照，從細(xì)胞免疫、體液免疫、細(xì)胞因子釋放等方面系統(tǒng)評(píng)價(jià)AP

4、S及CY處理對(duì)仔豬免疫功能的影響。結(jié)果表明，注射CY顯著地降低了斷奶仔豬平均日增重(ADG)、胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、血液白細(xì)胞(WBC)數(shù)量、淋巴細(xì)胞及CD4+細(xì)胞亞群百分含量、CD4+/CD8+比率、外周血淋巴細(xì)胞以及脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率、血清溶血素(HA)、IgG含量、脾定量溶血分光光度(QHS)以及血清細(xì)胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4的含量(P＜0.05)，表明細(xì)胞免疫功能和體液免疫功能都受到強(qiáng)烈的抑制；日糧中添加500mg/kg

5、的APS能有效緩解由CY引起的ADG、脾指數(shù)、WBC、淋巴細(xì)胞、CD4+、CD4+/CD8+、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率、HA、IgG、QHS、IFN-γ、IL-2的下降(P＜0.05)，逆轉(zhuǎn)免疫抑制。(3)采用脂多糖(LPS)免疫刺激炎性模型，研究APS對(duì)LPS免疫刺激的斷奶仔豬生產(chǎn)性能、炎性反應(yīng)、內(nèi)分泌激素的影響，探討了APS免疫抗炎作用及其機(jī)理。選用32頭體重為10.65±0.56kg的長(zhǎng)白×大白斷奶仔豬，2×2因子設(shè)計(jì)：日糧處理(0或500

6、mg/kgAPS)和免疫應(yīng)激(注射LPS或生理鹽水)。試驗(yàn)期21d，在第14d和21d，每日糧組中一半的豬腹腔注射50μg/kgBW的LPS，另一半注射等量的生理鹽水作對(duì)照。注射LPS后3h，采血測(cè)定血清細(xì)胞因子(IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-4、IL-10)、葡萄糖、胰島素、皮質(zhì)醇以及GH、IGF-Ⅰ的含量。結(jié)果顯示，LPS刺激顯著地降低了斷奶仔豬的ADG(P＜0.05)和日采食量(ADFI)(P＜0.05)，顯著地提高了血

7、清中的葡萄糖、皮質(zhì)醇、生長(zhǎng)激素、炎性細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6以及抗炎因子IL-10的含量(P＜0.05)，日糧中添加APS緩減了14～21d的ADG的下降，降低了血清中的葡萄糖、皮質(zhì)醇、生長(zhǎng)激素、炎性細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6的水平而提高了IGF-Ⅰ及抗炎因子IL-10的水平(P＜0.05)，糾正了GH/IGF-Ⅰ軸的異常。說(shuō)明APS可以通過(guò)降低炎性細(xì)胞因子以及GH、血糖、皮質(zhì)醇的含量，增加抗炎性因子如IL

8、-10的合成，恢復(fù)GH/IGF-Ⅰ軸的正常而發(fā)揮其免疫抗炎作用。(4)為深入研究APS的作用機(jī)制，在細(xì)胞水平上研究了APS的免疫調(diào)節(jié)作用，以0、10、20、40、80、160、320μg/mL系列濃度的APS溶液體外培養(yǎng)豬外周血、脾淋巴細(xì)胞，分離的豬外周血T、B細(xì)胞以及無(wú)胸腺裸鼠脾細(xì)胞等5種免疫細(xì)胞，觀測(cè)APS對(duì)不同免疫細(xì)胞增殖作用的影響，并探討了APS對(duì)體外培養(yǎng)仔豬外周血淋巴細(xì)胞釋放細(xì)胞因子IL-2、IFN-γ的影響。結(jié)果表明，APS