硫辛酸和維生素E在老年大鼠腎臟缺血再灌注損傷中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：氧自由基(oxygen．free．radical，OFR)是外源性氧化劑或細(xì)胞內(nèi)有氧代謝過程中產(chǎn)生的具有很高生物活性的氧分子。體內(nèi)產(chǎn)生的超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)等能迅速清除OFR，防止OFR．的堆積。缺血再灌注(ischemiareperfusion，IR)以后缺血和缺氧的直接結(jié)果是營養(yǎng)物質(zhì)的缺乏和ATP生成減少，從而導(dǎo)致OFR的大量產(chǎn)生，當(dāng)超過機(jī)體的清除能力時，體內(nèi)還原物質(zhì)被消耗，即可直接損傷組織和誘導(dǎo)細(xì)胞

2、凋亡。研究發(fā)現(xiàn)，OFR在腎臟疾病的發(fā)生發(fā)展中起著十分重要的作用。因此，如能減少OFR的合成和釋放，抑制和對抗其生物學(xué)效應(yīng)，可能對腎臟疾病的防治具有重要的意義。硫辛酸(lipoic acid，LA)和維生素E(vitamin e，VE)均具有抗氧化作用，本實(shí)驗(yàn)旨在采用生化、免疫組化、流式細(xì)胞術(shù)等方法觀察LA和VE對腎臟缺血再灌注損傷(renal ischemia reperfusion iniury，RIR)的作用，并探討其可能的作用機(jī)制

3、。 1、硫辛酸對缺血再灌注損傷老年大鼠腎臟熱休克蛋白70和一氧化氮的影響 方法：采用夾閉雙側(cè)。腎動、靜脈45分鐘后松夾再灌注的方法制作RIRI模型，觀察LA對老年大鼠RIRI的影響。IR組與IR+LA組均夾閉雙側(cè)腎動、靜脈45分鐘，然后去夾再灌。IR+LA組于夾閉前4周灌胃給予LA 250mg/ka/d，IR組則同法給予等量溶劑作為對照。再灌注后逐層縫合腹膜，腹壁肌肉和皮膚。Sham組除不夾閉雙側(cè)腎動、靜脈外，余手術(shù)操

4、作同前兩組。再灌注后24小時分批取腹主動脈血和尿液，測定Scr、血清MDA含量、血清BUN、血清SOD、血清一氧化氮(Nitrc oxide，NO)含量和尿UNAG，取血后迅速摘取雙側(cè)腎臟，于冰板上分別留取相同部位腎組織標(biāo)本，待測腎皮質(zhì)細(xì)胞凋亡率(流式細(xì)胞分析技術(shù))、腎皮質(zhì)熱休克蛋白70(免疫組織化學(xué))以及病理形態(tài)學(xué)觀察(HE染色)。 結(jié)果：IR組大鼠腎功能明顯受損，BUN、Scr、MDA、NO、UNAG均顯著高于Sham組(

5、80.55±22.13 vs 20.06±3.43，2.68±0.70 VS 1.08±0.21：3.61±0.74 vs 2.41±0.4 1，4.67±1.06 vs1.87±0.41，48.31±6.82 vs 15.43±5.97，P<0.01)，大鼠血清SOD顯著低于Sham組(471.51±15.60 VS vs 639.09±27.45，P<0.01)，腎小管上皮細(xì)胞明顯受損，以近曲小管為重，表現(xiàn)為腎小管管腔擴(kuò)張，管內(nèi)可見

6、管形和脫落細(xì)胞，上皮細(xì)胞核染色質(zhì)邊集，胞漿空泡變性、壞死，腎皮質(zhì)細(xì)胞出現(xiàn)明顯的凋亡峰，凋亡率與Sham組相比有顯著性差異(0.39±0.02 vs0.16±0.03，P<0.01)，HSP70表達(dá)明顯增強(qiáng)，腎小管上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)較多的棕黃色顆粒，呈彌漫性分布。腎小球未觀察到明顯棕黃色顆粒；而IR+LA組BUN、Scr、MDA、UNAG均較IR組明顯降低(49.46±4.85 vs 80.55±22.13，1.27±0.10 vs 2.

7、68±0.70；2.69±0.38 vs 3.61±0.74，21.09±4.29 vs48.31±6.82，P<0.01)，SOD較IR組明顯升高(619.61±13.84vs 471.51±15.60，P<0.01)，血清中NO含量顯著高于IR組(8.00±0.72 vs 4.67±1.06，P<0.01)，腎小管損傷范圍和程度均明顯小于和輕于IR組，腎小管上皮細(xì)胞胞核基本正常，管內(nèi)僅見少量管型。腎皮質(zhì)細(xì)胞凋亡率明顯低于IR組(0.

8、23±0.05 vs O.39±0.02，P<0.01)，HSP70表達(dá)明顯強(qiáng)于IR組。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：HSP70在大鼠RIRI的發(fā)生發(fā)展中可能起著重要作用。LA可能通過促進(jìn)HSP70大量表達(dá)，對抗OFR的生物學(xué)效應(yīng)，減輕OFR損傷而對大鼠RIRI起到一定的保護(hù)作用。 2 維生素E對大鼠腎臟缺血再灌注損傷的影響 方法：模型制備和實(shí)驗(yàn)方法同第一部分。IR+VE組于夾閉前4周灌胃給予VE 500mg/kg/d。

9、結(jié)果：IR組大鼠腎功能明顯受損，BUN、Scr、MDA、NO、UNAG均顯著高于Sham組(80.55±22.1 3 vs 20.06±3.43，2.68±0.70 vs 1.08±0.21：3.61±0.74 vs 2.41±0.41，4.67±1.06 vs1.87±0.41；48.31±6.82 vs 15.43±5.97，P<0.01)，大鼠血清中SOD顯著低于Sham組(471.51±15.60 vs 639.09±27.45

10、，P<0.01)，腎小管上皮細(xì)胞明顯受損，以近曲小管為重，表現(xiàn)為腎小管管腔擴(kuò)張，管內(nèi)可見管形和脫落細(xì)胞，上皮細(xì)胞核染色質(zhì)邊集，胞漿空泡變性、壞死，腎皮質(zhì)細(xì)胞出現(xiàn)明顯的凋亡峰，凋亡率明顯增高，與Sham組相比有顯著性差異(0.39±0.02 vs 0.16±0.03，P<0.01)，HSP70表達(dá)增加，腎小管上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)較多的棕黃色顆粒，呈彌漫性分布，腎小球未觀察到明顯棕黃色顆粒；而IR+VE組BUN、Scr、MDA、UNAG均較I

11、R組明顯降低(37.97±9.15 vs 80.55±22.13，1.34±0.10 vs 2.68±0.70；2.75±0.29 vs 3.61±0.74，23.92±2.73 vs48.31±6.82，P<0.01)，SOD較IR組明顯升高(570.92±19.76vs 471.51±15.60，P<0.01)，血清中NO顯著高于IR組(7.07±0.94 vs 4.67±1.06，P<0.01)，腎小管損傷范圍和程度均明顯小于和輕

12、于IR組，腎小管上皮細(xì)胞胞核基本正常，管內(nèi)僅見少量管型。腎皮質(zhì)細(xì)胞凋亡率明顯低于IR組(0.25±0.05 vs 0.39±0.02，P、MDA含量和腎皮質(zhì)細(xì)胞凋亡率均較sham組明顯增加，腎功能受損明顯，腎

13、皮質(zhì)HS.P70免疫反應(yīng)陽性顆粒表達(dá)增加。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明HSP70作為一種保護(hù)性的因子參與了大鼠RIRI的應(yīng)激過程。 2. LA和VE均可顯著降低RIRI大鼠的BUN、Scr、UNAG和MDA含量，使腎臟}tSP70免疫反應(yīng)陽性顆粒的表達(dá)明顯增加，表明他們均可通過不同的途徑促進(jìn)HSP70的表達(dá)。 3. LA和VE可能分別通過拮抗OFR損傷；增加腎臟HSP70含量，使腎血管舒張，腎血流量增加，從而對RIRI大鼠腎功能起到