維生素D受體在心肌缺血再灌注損傷中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:闡明維生素D受體(vitamin D receptor, VDR)在心肌缺血再灌注損傷中的作用及其分子機(jī)制。
　　內(nèi)容:首先，采用藥理學(xué)方法激活VDR觀察其在缺血再灌注損傷中的心肌保護(hù)作用;其次，通過功能缺失(loss of function)及功能增強(qiáng)(gain of function)實(shí)驗(yàn)觀察心肌組織特異VDR在心肌缺血再灌注損傷中的保護(hù)作用;最后，深入研究VDR信號通路調(diào)控心肌缺血再灌注損傷的分子機(jī)制。
　　方法

2、:以成年雄性C57BL/6小鼠為研究對象，采用結(jié)扎前降支30 min后進(jìn)行再灌注的方法構(gòu)建小鼠心肌缺血再灌注損傷模型。整個(gè)研究分為藥理學(xué)干預(yù)實(shí)驗(yàn)、心肌組織VDR功能缺失實(shí)驗(yàn)和心肌組織VDR功能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)。藥理學(xué)干預(yù)實(shí)驗(yàn)中，VDR激動(dòng)劑Calcitriol和Paricalcitol(PC)按1μg/kg體重的劑量于再灌注前15 min經(jīng)腹腔注射給藥。所有組小鼠均于再灌注3h時(shí)檢測細(xì)胞凋亡、自噬、氧化應(yīng)激/硝化應(yīng)激的指標(biāo)，再灌注24 h時(shí)檢測

3、心肌梗死面積、心功能及存活心肌代謝水平。采用Western Blot和熒光定量PCR方法檢測VDR的表達(dá)變化，用TUNEL染色和測定Caspase-3活性方法檢測心肌細(xì)胞凋亡，用伊文氏藍(lán)/TTC染色確定梗死面積、心臟超聲評估心功能、PET-CT檢測存活心肌代謝水平，通過測定Caspase-8、-9、-12活性、免疫組化、免疫熒光、Western Blot、透射電鏡、熒光定量PCR、ELISA等方法研究VDR對凋亡、自噬、氧化應(yīng)激/硝化應(yīng)

4、激的調(diào)控作用。
　　結(jié)果:正常心肌組織中可以檢測到VDR低水平的基礎(chǔ)表達(dá)，其表達(dá)量在缺血再灌注后顯著上調(diào)。采用藥理學(xué)方法激動(dòng)VDR明顯減少心肌細(xì)胞凋亡、縮小心肌梗死面積并改善左室收縮功能和存活心肌代謝水平。通過在體siRNA干擾的方法將心肌VDR敲低時(shí)，VDR激動(dòng)劑的心肌保護(hù)作用消失。而通過腺病毒介導(dǎo)心肌VDR過表達(dá)則可以減少心肌細(xì)胞凋亡、縮小心肌梗死面積并改善心功能。進(jìn)一步機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)激活VDR信號通路可以明顯減弱心肌缺血再灌注

5、誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激/硝化應(yīng)激，進(jìn)而抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmic reticulum stress，ERS)和線粒體功能紊亂介導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡并減少自噬功能失調(diào)介導(dǎo)的自噬相關(guān)的程序性細(xì)胞死亡。
　　結(jié)論:VDR是一種新發(fā)現(xiàn)的對抗缺血再灌注損傷的心肌保護(hù)因子，其（至少部分）通過減弱氧化應(yīng)激/硝化應(yīng)激，進(jìn)而抑制ERS和線粒體功能紊亂介導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡并改善自噬功能失調(diào)而發(fā)揮心肌保護(hù)作用。將來有望成為治療缺血性心臟病的新的干預(yù)靶點(diǎn)。