熱氧化大豆蛋白對(duì)肉雞的影響及維生素E和硫辛酸的調(diào)控研究.pdf

1、飼料中的蛋白質(zhì)在加工或長(zhǎng)期儲(chǔ)存過(guò)程中易與氧氣、酶類、金屬離子等多種促氧化劑接觸，且由于其具有較高的含量和反應(yīng)活性而易被氧化修飾。然而，目前有關(guān)飼料源氧化蛋白對(duì)養(yǎng)殖動(dòng)物健康影響的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本文研究熱處理和室溫儲(chǔ)存兩種方式對(duì)豆粕蛋白質(zhì)氧化的影響，并以大豆分離蛋白為原料，探討不同熱處理時(shí)間氧化大豆蛋白對(duì)AA肉雞生產(chǎn)性能、氧化還原狀態(tài)、免疫功能及細(xì)胞凋亡的影響;進(jìn)一步研究維生素E(VE)和硫辛酸(LA)對(duì)攝食氧化蛋白肉雞的調(diào)控作用及其機(jī)制

2、。本文分為以下六個(gè)部分:
　　試驗(yàn)一旨在研究豆粕中的蛋白質(zhì)在室溫儲(chǔ)存條件下的氧化變質(zhì)規(guī)律，同時(shí)探討干熱處理對(duì)豆粕和大豆分離蛋白(SPI)中蛋白質(zhì)氧化的影響。取新鮮豆粕200 g裝入自封袋，置于室溫下保存不同時(shí)間（1、10、20、30和60 d）;另取豆粕和SPI各20 g于烘箱中100℃加熱不同時(shí)間（0、1、2、4和8h），分析兩種處理方式對(duì)豆粕和SPI中氨基酸、蛋白質(zhì)羰基及巰基含量的影響。結(jié)果表明，隨加熱時(shí)間延長(zhǎng)，豆粕和SPI中

3、蘇氨酸、酪氨酸、賴氨酸及組氨酸含量在數(shù)值上逐漸降低;與新鮮豆粕（對(duì)照）相比，室溫儲(chǔ)存和干熱處理不同時(shí)間后蛋白質(zhì)羰基含量均顯著增加（P＜0.05）;隨儲(chǔ)存和干熱處理時(shí)間增加，豆粕蛋白質(zhì)巰基和總巰基基團(tuán)含量均逐漸降低;與正常SPI相比，加熱1h以上使SPI中蛋白質(zhì)羰基和巰基含量明顯降低(P＜0.05)，熱處理4h以上亦使SPI中游離氨基含量顯著降低（P＜0.05）。
　　試驗(yàn)二旨在研究不同熱處理時(shí)間SPI對(duì)肉雞生產(chǎn)性能、抗氧化功能、腸

4、道形態(tài)及細(xì)胞凋亡的影響。選取320只1日齡AA肉雞隨機(jī)分為4組，每組8個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10只。第1組試驗(yàn)肉雞飼喂正常未加熱處理SPI的基礎(chǔ)日糧（對(duì)照組），其余各組分別用加熱1、4及8h的SPI等量替代基礎(chǔ)日糧中的SPI，試驗(yàn)為期21d。結(jié)果表明，熱處理SPI8 h組21d肉雞體重較對(duì)照組顯著降低（P＜0.05）;與對(duì)照組相比，熱處理SPI8 h使21d肉雞血清ACTH和Cor水平、黏膜H2O2及血清、黏膜MDA含量增加(P＜0.05)，

5、熱處理SPI4 h以上使21d肉雞血清和黏膜GSH含量明顯降低(P＜0.05);與對(duì)照組相比，熱處理SPI8 h組21d肉雞十二指腸隱窩深度增加、腸道V/C值和21d空腸黏膜NOS活性明顯降低（P＜0.05）;熱處理SPI8 h組14和21d肉雞黏膜caspase-3活性和腸道細(xì)胞凋亡指數(shù)較對(duì)照組顯著增加（P＜0.05）。
　　試驗(yàn)三旨在研究不同熱處理時(shí)間SPI對(duì)內(nèi)雞免疫器官相對(duì)重量、免疫球蛋白、細(xì)胞因子及相關(guān)基因表達(dá)的影響。試驗(yàn)

6、設(shè)計(jì)同試驗(yàn)二。結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，熱處理SPI1和8h使14d肉雞肝臟相對(duì)重量明顯降低（P＜0.05），熱處理SPI4 h以上顯著降低21 d肉雞脾臟和法氏囊相對(duì)重量（P＜0.05）;熱處理SPI8 h組14d肉雞血清和十二指腸黏膜IgG含量較對(duì)照組明顯降低(P＜0.05);與對(duì)照組相比，熱處理SPI8h使21 d肉雞黏膜TNF-α含量(P=0.063)、脾臟和黏膜ICAM-1含量及黏膜IFN-γmRNA表達(dá)量（P＜0.05）增加;

7、熱處理SPI8 h組14d肉雞血清、21 d黏膜MPO活性較對(duì)照組顯著提高（P＜0.05），黏膜MPO mRNA表達(dá)量亦明顯增加(P＜0.05)。
　　試驗(yàn)四旨在研究VE和LA對(duì)攝食氧化蛋白肉雞生產(chǎn)性能、血清激素及腸道形態(tài)的影響。選取300只1日齡AA內(nèi)雞隨機(jī)分為5組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10只。第1組為對(duì)照組，飼喂正常SPI的基礎(chǔ)日糧，第2組用熱處理8h的SPI等量替代基礎(chǔ)日糧中的SPI，第3～5組分別在第2組日糧中額外添加2

8、00 mg/kg VE、200 mg/kg LA及200 mg/kg VE+200 mg/kg LA，試驗(yàn)為期21d。結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，熱處理氧化蛋白(HSPI組)可對(duì)內(nèi)雞生產(chǎn)性能造成一定負(fù)面影響（P＞0.05），并提高肉雞血清Cor、T3和T4含量及14d空腸隱窩深度(P＜0.05)，降低14d十二指腸絨毛高度和空腸V/C值（P＜0.05）。與HSPI組相比，日糧添加200 mg/kg VE可提高肉雞平均體重、日增重及采食量，同

9、時(shí)提高21 d肉雞血清T4含量和14 d空腸V/C值（P＜0.05），降低14d空腸隱窩深度(P＜0.05);日糧添加200 mg/kg LA明顯降低14d空腸隱窩深度(P＜0.05);日糧聯(lián)合添加200 mg/kg VE和LA可提高肉雞平均日增重、14d血清Cor含量及腸道V/C值，降低14d空腸隱窩深度（P＜0.05）。
　　試驗(yàn)五旨在研究VE和LA對(duì)攝食氧化蛋白肉雞抗氧化功能、Nrf2通路及腸道細(xì)胞凋亡的影響。試驗(yàn)設(shè)計(jì)同試驗(yàn)

10、四。結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，氧化蛋白組(HSPI)肉雞血清和組織清除自由基能力降低（P＜0.05），CAT、SOD、GSH-Px活性及GSH含量降低（P＜0.05），肝臟H2O2、血清和肝臟MDA含量明顯增加（P＜0.05）;肝臟內(nèi)Nrf2信號(hào)通路和NF-κB被激活(P＜0.05)，黏膜caspase-3含量和腸道細(xì)胞凋亡指數(shù)增加。與HSPI組相比，日糧添加200 mg/kg VE可提高肉雞肝臟清除羥自由基能力、肝臟CAT活性及黏膜GS

11、H含量(P＜0.05)，降低血清、組織MDA含量(P＜0.05)，明顯抑制肝臟Nrf2信號(hào)通路和NF-κB的激活（P＜0.05），黏膜caspase-3含量和腸道細(xì)胞凋亡指數(shù)降低(P＜0.05);日糧添加200 mg/kg LA可提高肉雞肝臟清除羥自由基能力，降低血清MDA含量和HO-1的蛋白表達(dá)量（P＜0.05）;日糧聯(lián)合添加200 mg/kg VE和LA可提高肉雞清除自由基能力、SOD和GST活性及GSH含量，血清和組織MDA含量顯

12、著降低（P＜0.05），明顯抑制肝臟Nrf2信號(hào)通路和NF-κB的激活(P＜0.05)，21d肉雞十二指腸黏膜caspase-3含量和細(xì)胞凋亡指數(shù)降低(P＜0.05)。
　　試驗(yàn)六旨在研究氧化蛋白對(duì)肉雞免疫功能的影響及維生素E和硫辛酸的調(diào)控作用。試驗(yàn)設(shè)計(jì)同試驗(yàn)四。結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，HSPI組21 d肉雞腸道黏膜TNF-α和ICAM-1含量及黏膜MPO表達(dá)量增加(P＜0.05)，21 d肉雞空腸黏膜NOS活性降低(P＜0.05

13、)。與HSPI組相比，日糧添加200 mg/kg VE提高了14d空腸黏膜IgG含量(P＜0.05)，明顯降低黏膜TNF-α和ICAM-1含量及21d血清MPO活性(P＜0.05);日糧添加200 mg/kg LA可提高14 d十二指腸黏膜IgG和SIgA含量及NOS活性（P＜0.05），降低黏膜ICAM-1含量和IFN-γ表達(dá)（P＜0.05）;日糧聯(lián)合添加200 mg/kgVE和LA顯著提高14 d血清IgG含量和十二指腸黏膜NOS活

14、性(P＜0.05)，降低黏膜ICAM-1含量、IFN-γ表達(dá)及21 d血清MPO活性(P＜0.05)。
　　綜上所述，得出以下結(jié)論:
　　(1)隨室溫儲(chǔ)存和干熱處理時(shí)間延長(zhǎng)，豆粕中蛋白質(zhì)氧化程度增加;干熱處理可加速大豆分離蛋白中蛋白質(zhì)的氧化。
　　(2)熱氧化大豆蛋白對(duì)肉雞生產(chǎn)性能造成明顯負(fù)面影響，并引起肉雞體內(nèi)代謝速度加快，日糧添加200 mg/kg VE可明顯提高肉雞的生產(chǎn)性能。
　　(3)氧化蛋白可通過(guò)降低

15、肉雞腸道絨毛高度、增加隱窩深度而對(duì)腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)造成不利影響;日糧添加VE或LA對(duì)腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)具有顯著的改善作用，聯(lián)合添加VE和LA較二者單獨(dú)使用時(shí)有更好的效果。
　　(4)肉雞攝食氧化蛋白后體內(nèi)抗氧化酶活性和自由基清除能力降低，導(dǎo)致ROS在體內(nèi)積累，進(jìn)而激活Nrf2信號(hào)通路和NF-κB;而日糧添加VE和LA可提高肉雞的抗氧化功能，從而減弱ROS對(duì)Nrf2通路和NF-κB的刺激作用。
　　(5)熱氧化大豆蛋白可對(duì)肉雞免疫功能造