青藤堿對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者滑膜細(xì)胞凋亡的影響及機(jī)制的研究.pdf

1、背景：類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rhermatoid arthritis，RA)是一種系統(tǒng)性自身免疫性疾病，滑膜炎為其關(guān)鍵的病理環(huán)節(jié)，滑膜細(xì)胞凋亡障礙所導(dǎo)致的滑膜細(xì)胞大量增生是滑膜炎的免疫反應(yīng)得以持續(xù)的主要問題所在。青藤堿(Sinomenine，SN)是從中藥青風(fēng)藤(Sinomenium scutum Rehd et Wils)中提取的生物堿單體。在治療RA方面，該藥具有較明確的療效，但其治療機(jī)制尚不十分明確。我們推測，誘導(dǎo)滑膜細(xì)胞凋亡可能是SN治

2、療RA的機(jī)制之一。因此，我們將觀察SN對RA患者滑膜細(xì)胞凋亡及增殖的影響，從細(xì)胞周期及凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)的變化來探討其作用機(jī)制，為SN在臨床上的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：酶消化法進(jìn)行RA滑膜細(xì)胞原代培養(yǎng)，本實(shí)驗(yàn)采用3～10代成纖維樣滑膜細(xì)胞(FLS)，用光鏡、電鏡等方法對培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察。當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)至對數(shù)生長期后，分為4組并作以下處理：(1)1組(正常對照組)：細(xì)胞培養(yǎng)液中不含SN；(2) 2組：正常對照+2.8 mm

3、ol/L SN；(3)3組：正常對照+3.0 mmol/L SN；(4)4組：正常對照+3.2 mmol/L SN。培養(yǎng)24或48 h后，用光鏡、熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀Annexin V-FITC及PI雙標(biāo)記法檢測SN誘導(dǎo)RA滑膜細(xì)胞的凋亡效應(yīng)，MTT法檢測SN抑制滑膜細(xì)胞增殖的影響，流式細(xì)胞儀檢測SN作用48 h時RA滑膜細(xì)胞周期及凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)水平的變化。 結(jié)果： 1．2.8 mmol/L、3.0 mmol/

4、L、3.2 mmol/L的SN分別作用24或48 h后滑膜細(xì)胞出現(xiàn)凋亡表現(xiàn)，如細(xì)胞變圓、胞體皺縮、細(xì)胞核熒光染色增強(qiáng)等。 2．2.8 mmol/L、3.0 mmol/L、3.2 mmol/L的SN作用24、48 h能夠抑制滑膜細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，與對照組相比有顯著差異(P<0.05)，其中以3.2 mmol/L濃度的SN作用48 h后誘導(dǎo)凋亡及抑制增殖最為顯著。 3．細(xì)胞周期顯示SN的作用在G<,1>～S期，并能阻滯