平胃散調(diào)控濕阻中焦證模型致胃腸水通道蛋白異常表達(dá)及細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響.pdf

1、[實(shí)驗(yàn)?zāi)康腯
　　本實(shí)驗(yàn)以前期成熟的濕阻中焦證動(dòng)物模型為研究平臺(tái)，旨在研究濕阻中焦證動(dòng)物模型胃腸AQPs的分布、含量，探索濕阻中焦證模型胃腸道的相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)因子以及平胃散的干預(yù)的發(fā)生發(fā)展關(guān)系，揭示胃腸道相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)因子的作用機(jī)制，為平胃散調(diào)控體內(nèi)水液代謝失調(diào)開(kāi)辟一條新的途徑，從而使得平胃散對(duì)機(jī)體影響機(jī)制的研究有系統(tǒng)、深徹、全面的認(rèn)識(shí)。
　　[實(shí)驗(yàn)方法]
　　采用黃秀深等的綜合造模方法進(jìn)行造模，模擬“外濕過(guò)盛，困阻脾胃，

2、飲食不節(jié)，濕從內(nèi)生，情志不遂，氣機(jī)受阻，水濕不運(yùn)“等幾大致濕因素，建立科學(xué)可靠的濕阻中焦證動(dòng)物模型。用免疫組化技術(shù)測(cè)定胃腸組織AQP的分布，用酶聯(lián)免疫法(ELISA)測(cè)定胃腸的組織、粘膜和血清AQP、AVP、VIP含量以及相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)因子的含量。
　　[實(shí)驗(yàn)結(jié)果]
　　1濕阻中焦證動(dòng)物模型胃腸水通道蛋白的病理特征性表達(dá)分布
　　1.1濕阻中焦證AQPs表達(dá)分布增加
　　與空白組相比，造模后AQP1在賁門(mén)和小腸中段

3、粘膜層表達(dá)分布增加;AQP2在小腸中段粘膜層、肌層、外膜層和大腸末端粘膜層表達(dá)分布增加;AQP3在賁門(mén)的粘膜層、小腸中段粘膜層及小腸中段外膜表達(dá)分布增加;AQP4在胃腸道的表達(dá)分布無(wú)明顯差異;AQP5在大腸末端的粘膜層表達(dá)分布增加;AQP7在賁門(mén)粘膜層、外膜層和小腸中段粘膜層及大腸末端粘膜層表達(dá)分布增加;AQP9在賁門(mén)外膜層表達(dá)分布增加。
　　1.2濕阻中焦證AQPs表達(dá)分布減少
　　與空白組相比，造模后AQP1在胃腸道表達(dá)

4、分布未見(jiàn)明顯減少趨勢(shì);AQP2在胃體中間粘膜表達(dá)分布減少;AQP3在胃腸道表達(dá)分布未見(jiàn)明顯減少趨勢(shì);AQP4在胃腸道表達(dá)分布未見(jiàn)明顯減少趨勢(shì);AQP5在胃體中間外膜層表達(dá)分布減少;AQP7在胃體中間和小腸中段的外膜層表達(dá)分布減少;AQP9在賁門(mén)粘膜層和胃體中間外膜層及小腸中段外膜層表達(dá)分布減少。
　　2平胃散干預(yù)濕阻中焦證胃腸水通道蛋白的表達(dá)分布
　　2.1增強(qiáng)作用
　　與模型組相比，經(jīng)平胃散治療后，增強(qiáng)賁門(mén)粘膜下組織

5、、胃體中間粘膜及小腸中段粘膜AQP1的表達(dá)分布;增強(qiáng)胃體中間粘膜、大腸中段粘膜及大腸末端粘膜下組織AQP2的表達(dá)分布;增強(qiáng)小腸中段組織AQP3的表達(dá)分布;增強(qiáng)大腸末端粘膜AQP5的表達(dá)分布;增強(qiáng)賁門(mén)粘膜和胃體中間組織AQP9的表達(dá)分布。
　　2.2抑制作用
　　與模型組相比，經(jīng)平胃散治療后，抑制濕阻中焦證的AQP表達(dá)分布:抑制賁門(mén)粘膜AQP1的表達(dá)分布;抑制大腸中段粘膜下組織AQP2的表達(dá)分布;抑制賁門(mén)粘膜和大腸中段粘膜AQ

6、P3的表達(dá)分布;抑制賁門(mén)粘膜AQP4的表達(dá)分布。
　　3相關(guān)調(diào)節(jié)機(jī)制的測(cè)定
　　3.1長(zhǎng)時(shí)調(diào)節(jié)機(jī)制的測(cè)定
　　3.1.1濕阻中焦證AQP含量的測(cè)定
　　3.1.1.1濕阻中焦證AQP含量上升
　　與空白組相比，造模后，大腸中段組織AQP0含量上升(P＞0.05);大腸末端組織AQP2含量上升(P＜0.05);小腸中段組織AQP3含量上升(P＞0.05);大腸中段粘膜AQP3含量上升(P＜0.05)。

7、　　3.1.1.2濕阻中焦證AQP含量下降
　　與空白組相比，造模后，結(jié)腸組織AQP0含量下降(P＜0.05);賁門(mén)組織AQP1含量下降(P＜0.01);胃體中間粘膜AQP1含量下降(P＜0.05);大腸中段組織AQP2含量下降(P＜0.05);小腸中段組織AQP3含量下降(P＜0.05);大腸中段組織AQP3含量下降(P＜0.05);胃體中間粘膜AQP9含量下降(P＜0.01);胃體中間組織AQP9含量下降(P＜0.05)。

8、r>　　3.1.2平胃散干預(yù)濕阻中焦證胃腸水通道蛋白的含量
　　3.1.2.1增強(qiáng)作用
　　與模型組相比，經(jīng)平胃散治療后，小腸中段組織AQP0含量上升(P＞0.05);賁門(mén)組織AQP1含量上升(P＞0.05);胃體中間粘膜AQP1含量上升(P＜0.01);大腸末端組織AQP2含量上升(P＞0.05);小腸中段組織AQP3含量上升(P＞0.05);結(jié)腸組織AQP3含量上升(P＞0.05);直腸組織AQP3含量上升(P＜0.05

9、);胃體中間粘膜AQP9含量上升(P＜0.01);胃體中間組織AQP9含量上升(P＞0.05)。
　　3.1.2.1抑制作用
　　與模型組相比，經(jīng)平胃散治療后，大腸中段組織AQP2含量下降(P＞0.05);大腸中段粘膜AQP3含量下降(P＞0.05)。
　　4短時(shí)調(diào)節(jié)機(jī)制的測(cè)定
　　4.1濕阻中焦證相關(guān)激素與AC-cAMP-PKA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的關(guān)系（胃）
　　由AVP和VIP介導(dǎo)的激素調(diào)節(jié)，作用在細(xì)胞信號(hào)途

10、徑中的各因子如:AC、cAMP、PKA的含量變化都表現(xiàn)出與AVP、VIP含量變化趨勢(shì)呈相同方向。
　　4.2濕阻中焦證相關(guān)激素與PLC-IP3/DG-CaM/PKC信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的關(guān)系（腸道）
　　造模后，AVP和VIP在血清中的含量均呈下降趨勢(shì)，且作用于信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的各種信號(hào)分子如:PLC、IP3、CaM、Ca2+在大腸組織的含量與AVP、VIP的含量相比，當(dāng)造模后AVP和VIP的含量降低，PLC、IP3、CaM、Ca2+

11、含量反而上升，但自然恢復(fù)組呈下降趨勢(shì)，故腸道的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑與胃基本一致（可能是胃與大腸在體內(nèi)生理功能不同所致）。
　　[實(shí)驗(yàn)結(jié)論]
　　濕阻中焦證模型造模和給藥后，不僅影響到胃腸水通道蛋白的分布的改變，而且還引起了胃腸水通道蛋白的含量的變化。說(shuō)明這種造模方式以及平胃散對(duì)通過(guò)影響水通道蛋白的含量和分布變化來(lái)引起大鼠體內(nèi)水電解質(zhì)的改變的。圍繞水通道蛋白的激素如AVP、VIP和相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的各種信號(hào)分子也發(fā)生了相應(yīng)的改變。說(shuō)