平胃散調(diào)控濕阻中焦證模型致胃腸水通道蛋白異常表達及細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響.pdf

1、[實驗?zāi)康腯
　　本實驗以前期成熟的濕阻中焦證動物模型為研究平臺，旨在研究濕阻中焦證動物模型胃腸AQPs的分布、含量，探索濕阻中焦證模型胃腸道的相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)因子以及平胃散的干預(yù)的發(fā)生發(fā)展關(guān)系，揭示胃腸道相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)因子的作用機制，為平胃散調(diào)控體內(nèi)水液代謝失調(diào)開辟一條新的途徑，從而使得平胃散對機體影響機制的研究有系統(tǒng)、深徹、全面的認識。
　　[實驗方法]
　　采用黃秀深等的綜合造模方法進行造模，模擬“外濕過盛，困阻脾胃，

2、飲食不節(jié)，濕從內(nèi)生，情志不遂，氣機受阻，水濕不運“等幾大致濕因素，建立科學(xué)可靠的濕阻中焦證動物模型。用免疫組化技術(shù)測定胃腸組織AQP的分布，用酶聯(lián)免疫法(ELISA)測定胃腸的組織、粘膜和血清AQP、AVP、VIP含量以及相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)因子的含量。
　　[實驗結(jié)果]
　　1濕阻中焦證動物模型胃腸水通道蛋白的病理特征性表達分布
　　1.1濕阻中焦證AQPs表達分布增加
　　與空白組相比，造模后AQP1在賁門和小腸中段

3、粘膜層表達分布增加;AQP2在小腸中段粘膜層、肌層、外膜層和大腸末端粘膜層表達分布增加;AQP3在賁門的粘膜層、小腸中段粘膜層及小腸中段外膜表達分布增加;AQP4在胃腸道的表達分布無明顯差異;AQP5在大腸末端的粘膜層表達分布增加;AQP7在賁門粘膜層、外膜層和小腸中段粘膜層及大腸末端粘膜層表達分布增加;AQP9在賁門外膜層表達分布增加。
　　1.2濕阻中焦證AQPs表達分布減少
　　與空白組相比，造模后AQP1在胃腸道表達

4、分布未見明顯減少趨勢;AQP2在胃體中間粘膜表達分布減少;AQP3在胃腸道表達分布未見明顯減少趨勢;AQP4在胃腸道表達分布未見明顯減少趨勢;AQP5在胃體中間外膜層表達分布減少;AQP7在胃體中間和小腸中段的外膜層表達分布減少;AQP9在賁門粘膜層和胃體中間外膜層及小腸中段外膜層表達分布減少。
　　2平胃散干預(yù)濕阻中焦證胃腸水通道蛋白的表達分布
　　2.1增強作用
　　與模型組相比，經(jīng)平胃散治療后，增強賁門粘膜下組織

5、、胃體中間粘膜及小腸中段粘膜AQP1的表達分布;增強胃體中間粘膜、大腸中段粘膜及大腸末端粘膜下組織AQP2的表達分布;增強小腸中段組織AQP3的表達分布;增強大腸末端粘膜AQP5的表達分布;增強賁門粘膜和胃體中間組織AQP9的表達分布。
　　2.2抑制作用
　　與模型組相比，經(jīng)平胃散治療后，抑制濕阻中焦證的AQP表達分布:抑制賁門粘膜AQP1的表達分布;抑制大腸中段粘膜下組織AQP2的表達分布;抑制賁門粘膜和大腸中段粘膜AQ

6、P3的表達分布;抑制賁門粘膜AQP4的表達分布。
　　3相關(guān)調(diào)節(jié)機制的測定
　　3.1長時調(diào)節(jié)機制的測定
　　3.1.1濕阻中焦證AQP含量的測定
　　3.1.1.1濕阻中焦證AQP含量上升
　　與空白組相比，造模后，大腸中段組織AQP0含量上升(P＞0.05);大腸末端組織AQP2含量上升(P＜0.05);小腸中段組織AQP3含量上升(P＞0.05);大腸中段粘膜AQP3含量上升(P＜0.05)。

7、　　3.1.1.2濕阻中焦證AQP含量下降
　　與空白組相比，造模后，結(jié)腸組織AQP0含量下降(P＜0.05);賁門組織AQP1含量下降(P＜0.01);胃體中間粘膜AQP1含量下降(P＜0.05);大腸中段組織AQP2含量下降(P＜0.05);小腸中段組織AQP3含量下降(P＜0.05);大腸中段組織AQP3含量下降(P＜0.05);胃體中間粘膜AQP9含量下降(P＜0.01);胃體中間組織AQP9含量下降(P＜0.05)。

8、r>　　3.1.2平胃散干預(yù)濕阻中焦證胃腸水通道蛋白的含量
　　3.1.2.1增強作用
　　與模型組相比，經(jīng)平胃散治療后，小腸中段組織AQP0含量上升(P＞0.05);賁門組織AQP1含量上升(P＞0.05);胃體中間粘膜AQP1含量上升(P＜0.01);大腸末端組織AQP2含量上升(P＞0.05);小腸中段組織AQP3含量上升(P＞0.05);結(jié)腸組織AQP3含量上升(P＞0.05);直腸組織AQP3含量上升(P＜0.05

9、);胃體中間粘膜AQP9含量上升(P＜0.01);胃體中間組織AQP9含量上升(P＞0.05)。
　　3.1.2.1抑制作用
　　與模型組相比，經(jīng)平胃散治療后，大腸中段組織AQP2含量下降(P＞0.05);大腸中段粘膜AQP3含量下降(P＞0.05)。
　　4短時調(diào)節(jié)機制的測定
　　4.1濕阻中焦證相關(guān)激素與AC-cAMP-PKA信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的關(guān)系（胃）
　　由AVP和VIP介導(dǎo)的激素調(diào)節(jié)，作用在細胞信號途

10、徑中的各因子如:AC、cAMP、PKA的含量變化都表現(xiàn)出與AVP、VIP含量變化趨勢呈相同方向。
　　4.2濕阻中焦證相關(guān)激素與PLC-IP3/DG-CaM/PKC信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的關(guān)系（腸道）
　　造模后，AVP和VIP在血清中的含量均呈下降趨勢，且作用于信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的各種信號分子如:PLC、IP3、CaM、Ca2+在大腸組織的含量與AVP、VIP的含量相比，當造模后AVP和VIP的含量降低，PLC、IP3、CaM、Ca2+

11、含量反而上升，但自然恢復(fù)組呈下降趨勢，故腸道的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑與胃基本一致（可能是胃與大腸在體內(nèi)生理功能不同所致）。
　　[實驗結(jié)論]
　　濕阻中焦證模型造模和給藥后，不僅影響到胃腸水通道蛋白的分布的改變，而且還引起了胃腸水通道蛋白的含量的變化。說明這種造模方式以及平胃散對通過影響水通道蛋白的含量和分布變化來引起大鼠體內(nèi)水電解質(zhì)的改變的。圍繞水通道蛋白的激素如AVP、VIP和相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的各種信號分子也發(fā)生了相應(yīng)的改變。說