辛伐他汀及缺血后處理對大鼠腎缺血再灌注損傷的保護作用及其機制研究.pdf

1、缺血再灌注損傷（ischemia reperfusion injury，IRI）是指組織或器官經(jīng)過一段時間缺血，當(dāng)恢復(fù)血流再灌注后，其細胞功能代謝障礙及結(jié)構(gòu)破壞反而較缺血性損傷進一步加重的現(xiàn)象。腎缺血再灌注損傷(renalischemia reperfusion injury，RIRI)是臨床上常見的病理生理現(xiàn)象，是多因素參與的復(fù)雜的病理過程，也是急性腎損傷的主要發(fā)病機制之一。急性腎缺血再灌注損傷與ATP的減少、大量氧自由基的生成、細胞

2、內(nèi)鈣超載、炎性介質(zhì)和粘附分子產(chǎn)生過多、一氧化氮(NO)合成減少和內(nèi)皮素(ET)釋放增多等因素有關(guān)。
　　辛伐他汀屬于水溶性他汀類藥物，是一種天然化合物，為無活性的內(nèi)酯，在肝臟羥化成β-羥酸等活性抑制物而發(fā)揮藥理作用。通過對HMG-CoA特異性抑制作用，使HMG-CoA不能轉(zhuǎn)變成甲羥戊酸(Mevalonate，MVA)，從而阻斷膽固醇的合成，降低血膽固醇的水平。他汀類藥物問世以來，已廣泛應(yīng)用于臨床治療高脂血癥。近年研究發(fā)現(xiàn)，他汀類藥

3、物尚具有強大的非降脂作用。這種非降脂作用也被認為是他汀類藥物的多效性（Pleiotropic effects），主要包括，提高一氧化氮生物利用度、改善內(nèi)皮功能、抗氧化應(yīng)激、抗炎、抑制細胞外基質(zhì)聚積、降低血管平滑肌細胞的遷移和增殖以及免疫調(diào)節(jié)等。
　　缺血后處理(ischemic postconditioning，IPO)是指對缺血組織或者器官實施供血重建之前進行反復(fù)多次短暫的缺血/再灌注，可以有效減輕供血重建后的缺血再灌注損傷。近

4、年來，國內(nèi)外對肝、腦、心臟以及肢體缺血后處理進行了較多的研究，各種研究結(jié)果均表明缺血后處理對IRI具有保護作用。腎臟對缺血缺氧較敏感，易發(fā)生IRI，但有關(guān)IPO對腎臟IRI的保護作用及作用機制，目前少有報道。本實驗旨在應(yīng)用生理、生化及免疫組織化學(xué)等方法觀察辛伐他汀及缺血后處理對RIRI的作用，并探討其可能的作用機制。
　　目的:觀察辛伐他汀及缺血后處理對RIRI的保護作用，并探討其可能的作用機制。
　　方法:采用夾閉雙側(cè)腎動

5、、靜脈45分鐘后松夾再灌的方法制作RIRI模型，觀察辛伐他汀及缺血后處理對大鼠RIRI損傷的影響。成年健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠40只，體重180～220g，在18-22℃實驗室安靜飼養(yǎng)兩日后，將大鼠隨機分為5組，分別為:①假手術(shù)組（Sham）、②溶劑對照組（Sham+Ⅴ）、③缺血再灌注組(I/R)、④辛伐他汀組(Sim)、⑤缺血后處理組(IPO)。
　　動物分組后，Sim組每日給予辛伐他汀20mg/kg灌胃

6、，1次/d，Sham組每日給予等容量生理鹽水灌胃，持續(xù)2周。
　　2周后復(fù)制RIRI動物模型。大鼠術(shù)前禁食12h。1％戊巴比妥鈉腹腔麻醉后固定于操作臺，腹正中切口打開腹腔，游離雙側(cè)腎動、靜脈。I/R和Sim組均用無創(chuàng)動脈夾夾閉雙側(cè)腎動、靜脈45分鐘，然后去除動脈夾，觀察雙側(cè)腎臟顏色由暗紫紅色變?yōu)轷r紅色，表明再灌注成功，逐層縫合腹膜，腹壁肌肉和皮膚。IPO組用無創(chuàng)動脈夾夾閉雙側(cè)腎動、靜脈45分鐘去除動脈夾，后行6個循環(huán)夾閉10s/再

7、灌10s后處理。Sham和Sham+Ⅴ組只開腹不夾閉腎動、靜脈，其余操作同上。各組動物再灌注24h后取腹主動脈血，測定血肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)。取血后迅速摘取雙側(cè)腎臟，測定腎組織丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)的含量。酶聯(lián)免疫分析法(ELISA)檢測腎組織內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)的含量。免疫組化法測定腎組織Bcl-2、Bax及HO-1的表達。腎組織病理形態(tài)學(xué)觀察腎損傷程度。
　　結(jié)

8、果:
　　1、Sham組和Sham+Ⅴ組大鼠腎小管未見明顯異常。I/R組腎小管明顯受損，以近曲小管為重，表現(xiàn)為腎小管上皮細胞混濁腫脹，管腔明顯擴張，管內(nèi)可見管型和脫落細胞，間質(zhì)增寬水腫，大量炎性細胞浸潤，管周血管明顯擴張淤血;上皮細胞核染色質(zhì)邊集，胞漿空泡樣變性、壞死。與I/R組相比，Sim和IPO組腎組織損傷明顯減輕，表現(xiàn)為腎小管上皮細胞輕度水腫，空泡變性，可見少量管型，間質(zhì)充血水腫減輕，有少量炎性細胞浸潤，管周稍有淤血，胞核基

9、本正常。
　　2、I/R組大鼠腎功能明顯受損，BUN、Scr含量均明顯高于Sham組和Sham+Ⅴ組(P＜0.01)。與I/R組相比，Sim和IPO組BUN和Scr含量均明顯降低(P＜0.01)。
　　3、RI/RI后，I/R組SOD活性較Sham組和Sham+Ⅴ組顯著降低(P＜0.05)，MDA含量顯著升高(P＜0.05);與I/R組相比，Sim和IPO組SOD活性明顯增加(P＜0.05)，MDA含量則明顯降低(P＜0.0

10、5)。
　　4、RI/RI后，I/R組NO及eNOS含量均明顯低于Sham組和Sham+Ⅴ組(P＜0.05);與I/R組相比，Sim和IPO組NO及eNOS含量均明顯增加(P＜0.05)。
　　5、Sham組和Sham+Ⅴ組Bcl-2與Bax蛋白無明顯表達，I/R組Bax蛋白表達明顯增多，而Bcl-2蛋白表達較少;與I/R組相比，Sim和IPO組Bax蛋白表達減少，而Bcl-2蛋白表達增加。
　　6、Sham組和Sha

11、m+Ⅴ組腎小管上皮細胞內(nèi)HO-1表達不明顯，I/R組腎小管上皮細胞內(nèi)HO-1表達較Sham組和Sham+Ⅴ組增多;與I/R組相比，Sim和IPO組腎小管上皮細胞內(nèi)HO-1表達均明顯增加。
　　結(jié)論:
　　1、腎缺血-再灌注使大鼠腎功能和結(jié)構(gòu)受損，表現(xiàn)為Scr和BUN升高，腎小管上皮細胞混濁腫脹、壞死，MDA含量增加，SOD活力降低，NO和eNOS含量均明顯降低，Bcl-2蛋白表達減少，Bax蛋白表達增加。
　　2、SI

12、M和IPO能顯著降低RIRI大鼠Scr和BUN水平，減輕大鼠腎組織損傷，改善腎功能，同時顯著降低MDA含量，提高腎組織SOD活力，并可明顯增加eNOS和NO含量，提示SIM和IPO減輕大鼠RI/RI的作用機制可能與清除氧自由基，抑制脂質(zhì)過氧化，提高腎組織的抗氧化能力有關(guān)。
　　3、SIM和IPO使RIRI大鼠腎組織Bax蛋白表達減少，Bcl-2蛋白表達增加，提示SIM和IPO減輕大鼠RI/RI的作用機制可能與上調(diào)Bcl-2表達、下