動(dòng)脈瘤性蛛網(wǎng)膜下腔出血與候選易感基因多態(tài)性的相關(guān)性研究.pdf

1、背景 蛛網(wǎng)膜下腔出血(subarachnoidhemorrhage，SAH)是由于血液自破裂的腦血管進(jìn)入蛛網(wǎng)膜下腔而引起的一組急性腦血管綜合癥，是神經(jīng)外科最為常見的危重急癥之一，其中約75％～90％是由顱內(nèi)動(dòng)脈瘤(intracranialaneurysm，IA)破裂引起，即動(dòng)脈瘤性蛛網(wǎng)膜下腔出血(AneurysmalSubarachnoidHemorrhage，aSAH)。臨床起病急，病情進(jìn)展快、死亡率和致殘率極高。普通人群中I

2、A破裂所致SAH的發(fā)病率為6～16人/10萬人/年。尸檢和血管造影檢查結(jié)果顯示，人群中IA的患病率約為1％～6％，平均報(bào)道患病率為2％。盡管隨著顯微外科和神經(jīng)放射學(xué)的發(fā)展，IA破裂患者死亡率近年來有所下降。然而，首次破裂患者仍然有高達(dá)40％～50％的死亡率，再次出血患者死亡率增加30％。幸存者中，相當(dāng)一部分患者不同程度地存在各種神經(jīng)功能缺失，僅約1/3的患者預(yù)后良好。因而，近年來IA患者總體預(yù)后仍無較大程度的改善。造成這一局面的主要原因

3、之一是由于人們對(duì)IA的病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。 目前已知與IA破裂有關(guān)的因素包括吸煙、飲酒、吸食可卡因、口服避孕藥及抗凝劑、大氣壓變化、季節(jié)變化等外因，內(nèi)因主要有性別、高血壓、糖尿病和血流動(dòng)力學(xué)因素等。雖然目前已公認(rèn)年齡、發(fā)病時(shí)的臨床狀態(tài)、有無腦血管痙攣和手術(shù)后的并發(fā)癥等是影響動(dòng)脈瘤性蛛網(wǎng)膜下腔出血患者預(yù)后的重要因素，但是相同狀態(tài)的患者預(yù)后也可存在較大的差異，遺傳異質(zhì)性可能在顱內(nèi)動(dòng)脈瘤患者的發(fā)病過程中起著非常重要的作用。因而

4、，目前普遍認(rèn)為，IA是一種由多種環(huán)境因素和多個(gè)易感基因共同作用的多基因遺傳病。最近許多學(xué)者紛紛報(bào)道了一些可能與動(dòng)脈瘤遺傳性相關(guān)的易感基因，其中一些基因的多態(tài)性可能與動(dòng)脈瘤的發(fā)病和預(yù)后密切相關(guān)。鑒于易感基因在疾病早期診斷、篩選和防治中的重要意義以及國際上在此方面的迅猛發(fā)展，對(duì)我國IA患者的易感基因進(jìn)行相關(guān)的研究勢(shì)在必行。而經(jīng)檢索文獻(xiàn)，關(guān)于我國IA患者易感基因的研究較少。 本文以我國華南地區(qū)漢族人中的aSAH患者作為研究對(duì)象，從遺傳

5、學(xué)和分子流行病學(xué)的角度對(duì)患者和正常對(duì)照者外周血中的相關(guān)候選易感基因基質(zhì)金屬蛋白酶-9(mmp-9)和載脂蛋白e(apoe)的基因多態(tài)性進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)將這兩種候選易感基因的基因型分別與aSAH患者的臨床特征及預(yù)后進(jìn)行相關(guān)分析，為從分子水平對(duì)aSAH易感人群進(jìn)行篩選、早期診斷和防治以及預(yù)后判斷提供新的思路。 研究目的 1.調(diào)查中國南方漢族人中aSAH患者和健康人群中mmp-9基因和apoe基因的基因型頻率和分布規(guī)律，探討兩種

6、基因與aSAH發(fā)病之間的關(guān)系； 2.探討mmp-9基因和apoe基因的基因型與aSAH患者預(yù)后之間的關(guān)系。 研究方法 1.以廣州醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院神經(jīng)外科2003年9月1日至2005年5月1日收治的62例aSAH患者作為研究對(duì)象，并選取80名健康志愿者作為對(duì)照組，采集并抽提患者或健康對(duì)照者空腹外周靜脈血DNA，設(shè)計(jì)合成mmp-9基因上下游引物，PCR擴(kuò)增后RFLP分析患者的基因型，計(jì)算C、T等位基因的出現(xiàn)頻率，作

7、x2檢驗(yàn)分析病例組和對(duì)照組各基因型和等位基因出現(xiàn)頻率的差異性。并計(jì)算其比值比(OR)和95％可信區(qū)間(95％CI)，探討mmp-9基因型與aSAH發(fā)病的相關(guān)性；同時(shí)對(duì)患者發(fā)病3個(gè)月后的臨床資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，分析mmp-9基因型與預(yù)后的相關(guān)性，用logistic回歸分析確定獨(dú)立危險(xiǎn)因素；同時(shí)記錄所有患者的年齡、性別、發(fā)病情況、Hunt-Hess分級(jí)、Fisher分級(jí)、動(dòng)脈瘤的特征、發(fā)病3個(gè)月后的GOS評(píng)分結(jié)果。分析年齡、性別、Hunt-Hes

8、s分級(jí)和Fisher分級(jí)與預(yù)后的相關(guān)性，用logistic回歸分析確定獨(dú)立危險(xiǎn)因素。2.采集患者或健康對(duì)照者空腹外周靜脈血并抽提基因組DNA，設(shè)計(jì)合成apoe基因上下游引物，PCR擴(kuò)增后RFLP分析患者的基因型，計(jì)算ε2、ε3和ε4的出現(xiàn)頻率，作x2檢驗(yàn)分析病例組和對(duì)照組各基因型和等位基因出現(xiàn)頻率的差異性。并計(jì)算其比值比(OR)和95％可信區(qū)間(95％CI)，探討apoe基因型與aSAH發(fā)病的相關(guān)性，用logistic回歸分析確定獨(dú)立危

9、險(xiǎn)因素。 研究結(jié)果 1.在病例組和對(duì)照組中，mmp-9基因型皆以C/C型頻率最高，C/T型次之，均未檢測(cè)到T/T基因型，病例組雜合型(C/T型)比例明顯高于對(duì)照組，兩組之間的差異有顯著性(p＜0.05)。T型等位基因在病例組中的頻率明顯高于對(duì)照組，二者之間的差異有顯著性(p＜0.05)。MMP-9等位基因攜帶與aSAH發(fā)病的關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)，T等位基因攜帶者發(fā)生aSAH的危險(xiǎn)性較非T攜帶者高6.45倍(OR=6.45)，而C

10、等位基因攜帶者發(fā)生aSAH的危險(xiǎn)性無增高(OR=1.00)；aSAH患者基因型及隨訪3個(gè)月后的臨床資料分析結(jié)果顯示，62例患者中有4例在住院期間死亡，隨訪3個(gè)月有6例患者生活不能自理，預(yù)后不良。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，年齡、性別與預(yù)后的相關(guān)性不明顯(p＞0.05)；而Hunt-Hess分級(jí)和Fisher分級(jí)與預(yù)后不良存在相關(guān)性(p＜0.05)；C/C純合子與C/T雜合子患者隨訪3個(gè)月后的預(yù)后無明顯差異(p＞0.05)；結(jié)合Hunt-Hess分

11、級(jí)和Fisher分級(jí)等臨床資料后的Logistic多元回歸分析未發(fā)現(xiàn)T型等位基因攜帶者與患者患病3個(gè)月后的不良預(yù)后之間存在相關(guān)性； 2.在病例組和對(duì)照組中，apoe基因型皆以ε3/ε3型頻率最高，ε3/ε4、ε3/ε2次之，ε2/ε2、ε2/ε4、ε4/ε4很低。正常對(duì)照組中未發(fā)現(xiàn)ε4/ε4，病例組中發(fā)現(xiàn)2例ε4/ε4，但兩組各apoe基因型頻率之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。病例組和對(duì)照組等位基因ε4頻率之間的差異具有統(tǒng)

12、計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，ε2和ε3等位基因頻率與對(duì)照組相比較無顯著性差異(P＞0.05)；apoe等位基因攜帶與aSAH發(fā)病的關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)，ε4攜帶者發(fā)生aSAH的危險(xiǎn)性較非ε4攜帶者高2.11倍(OR=2.11)，而ε2和ε3攜帶者發(fā)生aSAH的危險(xiǎn)性并未增高(OR分別為0.83和1.09)。基因型分析發(fā)現(xiàn)ε2、ε3攜帶者與預(yù)后的相關(guān)性不明顯，而ε4攜帶者與患者的不良預(yù)后存在相關(guān)性(p＜0.05)；結(jié)合Hunt-Hess分級(jí)和Fis

13、her分級(jí)等臨床資料后的Logistic多元回歸分析發(fā)現(xiàn)ε4基因型與不良預(yù)后關(guān)系更為密切(OR=3.80，p＜0.01)。 結(jié)論 1.T等位基因是中國南方漢族人群動(dòng)脈瘤性蛛網(wǎng)膜下腔出血發(fā)病的危險(xiǎn)因子之一；T型等位基因與患者患病3個(gè)月后的不良預(yù)后之間無明顯相關(guān)性； 2.ε4等位基因是中國南方漢族人群動(dòng)脈瘤性蛛網(wǎng)膜下腔出血發(fā)病的危險(xiǎn)因子之一；apoe4基因是動(dòng)脈瘤性蛛網(wǎng)膜下腔出血發(fā)病的危險(xiǎn)因子，與不良預(yù)后密切相關(guān)。