靶向survivin核酶和siRNA誘導腫瘤細胞凋亡研究.pdf

1、目的：構建噬菌體Phi29馬達RNA與靶向survivin核酶及siRNA的嵌合體，研究其沉默survivin基因的表達及其誘導腫瘤細胞凋亡的效應。 方法：構建pRNA/Ribozyme（survivin）和pRNA/siRNA（survivin）嵌合體，應用脂質體轉染技術，將其轉染入人腫瘤細胞株MCF—7和Hela細胞。采用real—time PCR方法檢測轉染細胞與對照細胞內survivin基因mRNA的表達水平，通過倒置顯

2、微鏡、倒置熒光顯微鏡以及Annexin—V/PI雙染后流式細胞術（FCM）檢測實驗組與對照組腫瘤細胞凋亡率。 結果：體外細胞模型研究結果表明：①轉染pRNA/Ribozyme（survivin）嵌合體的人乳腺癌細胞株MCF—7與轉染突變體pRNA/Ribozyme（mutant）以及未轉染對照組比較，轉染pRNA/Ribozyme（survivin）嵌合體的人腫瘤細胞株survivin mRNA表達水平顯著降低，轉染突變體pRN

3、A/Ribozyme（mutant）與未轉染對照組比較無顯著差異；②轉染pRNA/Ribozyme（survivin）和pRNA/siRNA（survivin）嵌合體后，細胞凋亡率明顯增高；③通過共轉染GFP表達質粒和pRNA/siRNA（GFP）后，采用倒置熒光顯微鏡和FCM檢測結果表明，pRNA/siRNA（GFP）可顯著沉默GFP的表達，而pRNA/siRNA（survivin）嵌合體對GFP的表達無抑制作用，表明pRNA/siR