2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、目的:本課題通過(guò)對(duì)比銅綠假單胞菌野生株P(guān)AOl及密度感知系統(tǒng)(QS)las和rhl基因缺失的雙變異株P(guān)AO-JP2的生物學(xué)特性,探討QS系統(tǒng)對(duì)銅綠假單胞菌致病性、耐藥性的影響;并通過(guò)對(duì)經(jīng)羅紅霉素、阿奇霉素、乙酰螺旋霉素處理后的PAOl、PAO-JP2生物被膜的形態(tài)、致病因子以及l(fā)asR基因轉(zhuǎn)錄水平比較,探討阿奇霉素等大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物對(duì)QS系統(tǒng)在銅綠假單胞菌生物被膜致病性、生物被膜的形成以及在轉(zhuǎn)錄水平干擾密度感知信號(hào)因子AHL的合成的影響。

2、 方法:采用改良的組織培養(yǎng)平板法建立PAOl及PAO-JP2生物被膜模型;應(yīng)用銀染法快速鑒定進(jìn)行PAOl及PAO-JP2生物被膜形態(tài)學(xué)的比較,采用計(jì)算機(jī)圖像處理系統(tǒng)對(duì)銀染法快速鑒定后的硅膠片進(jìn)行圖像分析;應(yīng)用瓊脂平板稀釋法測(cè)定3種大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物對(duì)PAOl、PAO-JP2的MIC值:應(yīng)用PTSB培養(yǎng)基培養(yǎng)及酶.底物反應(yīng)后測(cè)量吸光度值觀(guān)察大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物對(duì)銅綠假單胞菌胞外毒力因子彈性蛋白酶(elastase,El)的影響;應(yīng)用TSBD

3、培養(yǎng)基培養(yǎng)應(yīng)用SDS-PAGE以及Westem-Blot技術(shù)觀(guān)察大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物對(duì)銅綠假單胞菌胞外毒力因子外毒素(toxA)的影響;應(yīng)用M-H瓊脂平板培養(yǎng)、TRizol法提取RNA利用反轉(zhuǎn)錄技術(shù)(RT-PCR)觀(guān)察大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物對(duì)lasR基因轉(zhuǎn)錄水平上的影響。 結(jié)果:應(yīng)用銀染法快速鑒定及計(jì)算機(jī)圖像處理系統(tǒng)分析觀(guān)察不同濃度羅紅霉素、阿奇霉素、乙酰螺旋霉素處理的PAOl、PAO0-P2生物被膜,可見(jiàn)隨著羅紅霉素、阿奇霉素濃度增大(20

4、ug/ml,40ug/ml,80ug/ml),PAOl、PAO-JP2生物被膜菌逐漸被清除,細(xì)菌量逐漸減少,同一濃度下,對(duì)PAOl較PAO-JP2清除明顯,乙酰螺旋霉素處理組此現(xiàn)象不明顯;PTSB培養(yǎng)基培養(yǎng)及酶-底物反應(yīng)后測(cè)量吸光度值觀(guān)察大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物對(duì)銅綠假單胞菌彈性蛋白酶的影響可見(jiàn)隨著阿奇霉素、羅紅霉素的濃度增加,吸光度值呈下降趨勢(shì),乙酰螺旋霉素處理組此現(xiàn)象不明顯;TSBD培養(yǎng)基培養(yǎng)應(yīng)用SDS-PAGE以及Westem-Blot技術(shù)

5、觀(guān)察大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物對(duì)銅綠假單胞菌外毒素的影響,可見(jiàn)隨著羅紅霉素、阿奇霉素的濃度增加,外毒素條帶灰度減弱示其生成呈下降趨勢(shì),乙酰螺旋霉素處理組此現(xiàn)象不明顯;利用反轉(zhuǎn)錄技術(shù)(RT-PCR)觀(guān)察大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物對(duì)lasR基因轉(zhuǎn)錄水平上的影響可見(jiàn)lasR基因轉(zhuǎn)錄隨著阿奇霉素的濃度增加,lasR條帶灰度減弱示其生成呈下降趨勢(shì),PAO-JP2組未發(fā)現(xiàn)lasR條帶。 結(jié)論:銅綠假單胞菌是產(chǎn)生細(xì)菌生物被膜主要致病菌。本研究發(fā)現(xiàn)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物在生物

6、被膜培養(yǎng)過(guò)程中分別處理PAOl、PAO-JP2,結(jié)果提示大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物(14、15元環(huán))通過(guò)對(duì)QS系統(tǒng)的影響可有效抑制銅綠假單胞菌生物被膜的形成;通過(guò)QS系統(tǒng)有效抑制銅綠假單胞菌的毒力因子的產(chǎn)生,16元環(huán)的大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物乙酰螺旋霉未見(jiàn)上述結(jié)論;lasR基因的反轉(zhuǎn)錄絡(luò)果提示阿奇霉素可在轉(zhuǎn)錄水平抑制QS系統(tǒng)發(fā)揮其作用。綜上所述,本研究發(fā)現(xiàn)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物阿奇霉素通過(guò)抑制銅綠假單胞菌QS系統(tǒng)的lasR基因轉(zhuǎn)錄,有效的抑制相關(guān)致病因子彈性蛋白酶和

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