銅綠假單胞菌耐喹諾酮類藥物的分子機制研究.pdf

1、銅綠假單胞菌因其內(nèi)在特點,對多種抗菌藥物表現(xiàn)出天然或獲得性耐藥.因此,銅綠假單胞菌耐藥株可作為研究細菌耐藥的分子機制,研究開發(fā)抗耐藥細菌藥物的模型菌株.該研究首先從128株銅綠假單胞菌臨床分離株中,獲得大量對喹諾酮類藥物耐藥菌株;接著對耐藥株Ⅱ類拓撲異構(gòu)酶基因突變與耐喹諾酮類藥物的關(guān)系,MexAB-OprM主動外排系統(tǒng)oprM結(jié)構(gòu)基因的表達,mexR調(diào)節(jié)基因在MexAB-OprM外排系統(tǒng)中的作用以及gyrA基因突變與MexAB-OprM

2、主動外排在細菌生物膜耐藥機制中的作用等進行了較為深入的研究.128株銅綠假單胞菌臨床分離株對常用抗菌藥物的耐藥性研究表明:銅綠假單胞菌對頭孢曲松、諾氟沙星和環(huán)丙沙星的耐藥率高達69.5﹪、57.8﹪和26.6﹪.其中,有17株對四種喹諾酮類藥物呈交叉耐藥,占臨床分離株的13.3﹪;13株對實驗所用的抗菌藥物表現(xiàn)出多重耐藥性,占臨床分離株的10.2﹪.可見銅綠假單胞菌臨床分離株耐藥的嚴重性.用微量棋盤稀釋法對喹諾酮與β-內(nèi)酰胺類藥物聯(lián)合用

3、藥研究顯示,左氧氟沙星、環(huán)丙沙星與頭孢他啶、哌拉西林聯(lián)合用藥對大多數(shù)臨床分離銅綠假單胞菌具有協(xié)同或相加作用,其抗菌活性明顯增強.因此,抗假單胞菌的β-內(nèi)酰胺類藥物與喹諾酮類藥物聯(lián)合用藥治療銅綠假單胞菌感染是切實可行的.對20株銅綠假單胞菌喹諾酮類藥物耐藥株的gyrA基因PCR產(chǎn)物進行RFLP分析表明,用PCR擴增銅綠假單胞菌gyrA基因的喹諾酮耐藥決定區(qū),然后用SacⅡ酶切擴增片段,可快速檢測gyrA基因第83位氨基酸密碼子發(fā)生點突變的

4、銅綠假單胞菌喹諾酮藥物耐藥株.用熒光法測定對環(huán)丙沙星不同敏感性的銅綠假單胞菌細胞內(nèi)環(huán)丙沙星蓄積量研究表明,多重耐藥株細胞內(nèi)環(huán)丙沙星穩(wěn)定態(tài)濃度顯著低于敏感株;加入能量抑制劑碳酰氰基-對-氯苯腙,所有菌株細胞內(nèi)環(huán)丙沙星蓄積量增加,但只有多重耐藥株細胞內(nèi)環(huán)丙沙星的濃度增加顯著,表明多重耐藥株具有主動外排作用.MexAB-OprM主動外排是導(dǎo)致野生型銅綠假單胞菌對多種抗生素產(chǎn)生耐藥性的主要因素.對MexAB-OprM外排系統(tǒng)的調(diào)節(jié)基因mexR的

5、研究結(jié)果顯示,銅綠假單胞菌主動外排多重耐藥株P(guān)N1和PN16的mexR基因編碼第66位氨基酸的堿基發(fā)生了單點突變;將含有mexR突變基因的重組質(zhì)粒pMD18-T/ mexR轉(zhuǎn)化到了銅綠假單胞菌敏感菌PA2中,重組菌PA2獲得了對環(huán)丙沙星的部分耐藥性.用RT-PCR方法在重組菌PA2中擴增出了oprM基因片段.這說明MexAB-OprM主動外排系統(tǒng),可能受mexR基因的調(diào)控.因此,我們有理由相信,mexR基因?qū)⒂锌赡艹蔀楹Y選抑制主動外排耐