梓醇對魚藤酮誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、魚藤酮(Rotenone)是一種線粒體抑制類殺蟲劑，對中樞神經(jīng)系統(tǒng)有毒性作用，與帕金森病(Parkinson's disease PD)存在著潛在的聯(lián)系。神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞如星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞與神經(jīng)元相互作用，相輔相成，共同構(gòu)成了神經(jīng)系統(tǒng)，對神經(jīng)系統(tǒng)起支持，調(diào)節(jié)作用。梓醇是從中藥地黃中提取的神經(jīng)活性物質(zhì)，屬于環(huán)烯醚萜苷類。本論文以魚藤酮誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞為研究對象，探究梓醇對該PD模型細(xì)胞的神經(jīng)保護作用及其作用機制。主要研究內(nèi)容與結(jié)果如

2、下:
　　(1)從新生小鼠大腦皮層中分離并培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞，經(jīng)免疫染色鑒定后，純度都達(dá)到90％以上。用不同濃度的魚藤酮分別誘導(dǎo)損傷兩種神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變，存活率有不同程度的下降，其中星形膠質(zhì)細(xì)胞對魚藤酮的耐受性較高。
　　(2)用魚藤酮誘導(dǎo)損傷的星形膠質(zhì)細(xì)胞作為PD細(xì)胞模型，梓醇預(yù)處理半小時后，檢測梓醇對模型細(xì)胞的神經(jīng)保護作用。利用MTT法，形態(tài)學(xué)觀察，以及各種生化檢測方法進行研究，實驗結(jié)果表明:梓醇

3、能顯著提高魚藤酮誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞的存活率，同時對其形態(tài)有改善作用。此外，梓醇可降低星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)活性氧(Reactive OxygenSpecies ROS)的生成，增加還原型谷胱甘肽(GSH)的含量，抑制半胱天冬酶Caspase-3的活性，減少胞外谷氨酸的積累。由此可見，梓醇可通過抗氧化作用，抗凋亡作用，抗谷氨酸興奮性毒性作用來抵抗魚藤酮產(chǎn)生的神經(jīng)毒性，進而起到神經(jīng)保護作用。
　　(3)為了進一步探討梓醇抗谷氨酸興奮性毒性作用

4、的機理。我們利用實時定量PCR技術(shù)和western blot技術(shù)分別檢測了梓醇對魚藤酮處理后的星形膠質(zhì)細(xì)胞中谷氨酸轉(zhuǎn)運體GLAST和GLT-1 mRNA及其轉(zhuǎn)運體蛋白表達(dá)量的影響。結(jié)果表明，梓醇可顯著增加受損星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運體GLAST mRNA及其蛋白的表達(dá)量，但對GLT-1的表達(dá)量無顯著影響。此外，通過檢測Na+/K+-ATPase活性的改變，我們發(fā)現(xiàn)梓醇可以恢復(fù)由魚藤酮引起的Na+/K+-ATPase活性的降低，提高谷氨酸轉(zhuǎn)運體

5、的活性。由此可見，梓醇一方面通過影響谷氨酸轉(zhuǎn)運體的表達(dá)量，另一方面通過影響谷氨酸轉(zhuǎn)運體的活性，來改善谷氨酸轉(zhuǎn)運體的功能，促進星形膠質(zhì)細(xì)胞對谷氨酸的攝取，從而降低了胞外谷氨酸濃度，間接地起到保護神經(jīng)元的作用。
　　以上結(jié)果表明，梓醇可對魚藤酮誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生神經(jīng)保護作用，包括其抗氧化作用，抗凋亡作用，抗谷氨酸興奮性毒性作用。其中抗谷氨酸興奮性毒性作用是與梓醇能影響谷氨酸轉(zhuǎn)運體GLAST的表達(dá)以及提高Na+/K+-ATPase活