IL-17對星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖及活化的調(diào)節(jié)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:研究IL-17對原代培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞中MIP-1α表達(dá)的調(diào)節(jié)作用及其作用機(jī)制，為多發(fā)性硬化癥等神經(jīng)炎性反應(yīng)相關(guān)疾病提供潛在的治療靶點(diǎn)。
　　方法:應(yīng)甩Real-time PCR、ELISA法檢測星形膠質(zhì)細(xì)胞MIP-1α的表達(dá);RT-PCR檢測IL-17RA在星形膠質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá);應(yīng)用Western blot檢測IL-17對星形膠質(zhì)細(xì)胞Src/MAPK/PI3K/NF-kB信號(hào)通路中信號(hào)分子的活化及其星形膠質(zhì)細(xì)胞活化的標(biāo)志物

2、GFAP的表達(dá)水平;應(yīng)用免疫細(xì)胞染色和免疫組織染色技術(shù)檢測原代培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞和EAE小鼠模型中的GFAP的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:1）不同濃度的IL-17(25，50，100ng/ml)可顯著誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞中MIP-1α水平表達(dá)上調(diào);2）IL-17作用于星形膠質(zhì)細(xì)胞上的IL-17RA發(fā)揮作用，且這種效應(yīng)可被IL-17RA中和性抗體抑制;3）IL-17能誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞中酪氨酸蛋白激酶Src磷酸化，并且Src抑制劑-PP2（但不是

3、其非活性對照物-PP3）預(yù)處理能顯著抑制IL-17引起的星形膠質(zhì)細(xì)胞中MIP-1α表達(dá)增加;4）IL-17能誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞中Src/MAPK/PI3K通路中信號(hào)分子磷酸化，Src抑制劑-PP2（但不是其非活性對照物-PP3）預(yù)處理能顯著抑制IL-17引起的星形膠質(zhì)細(xì)胞中MAPK和PI3K活化，進(jìn)一步研究表明ERK，JNK，PI3K特異性抑制劑預(yù)處理均能顯著抑制IL-17引起的星形膠質(zhì)細(xì)胞中MIP-1α表達(dá)增加;5）IL-17能誘導(dǎo)星形

4、膠質(zhì)細(xì)胞中核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活化，IKK-2特異性抑制劑SC514預(yù)處理能顯著抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞中MIP-1α表達(dá)增加;6）IL-17可顯著誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞中GFAP表達(dá)增加且呈時(shí)間依賴性變化，且這種效應(yīng)可被MIP-1α中和性抗體抑制;7）整體實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證MIP-1α表達(dá)上調(diào)和星形膠質(zhì)細(xì)胞活化的相關(guān)性。
　　結(jié)論:IL-17A通過作用原代星形膠質(zhì)細(xì)胞中IL-17RA誘導(dǎo)MIP-1α的表達(dá)上調(diào)，引起星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化，其作用機(jī)制與