CysLT受體在LPS誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥和氧化應(yīng)激反應(yīng)中的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、半胱氨酰白三烯（CysLTs）是中樞重要的炎癥介質(zhì)，CysLTs通過作用其受體(CysLT1R和CysLT2R)發(fā)揮效應(yīng)。最近的研究發(fā)現(xiàn)，CysLT1R和CysLT2R調(diào)節(jié)腦缺血神經(jīng)炎癥。但是，CysLTR是否調(diào)節(jié)帕金森?。≒D）相關(guān)的小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥和氧化應(yīng)激尚待研究。
　　本項(xiàng)目擬在小膠質(zhì)細(xì)胞激活劑脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的BV2小膠質(zhì)細(xì)胞模型，研究CysLT1R和CysLT2R在LPS誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥和氧化應(yīng)激反應(yīng)中的調(diào)節(jié)作用

2、，并初步探討其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。旨在闡明CysLTR作為PD神經(jīng)炎癥治療靶點(diǎn)的意義。
　　方法：
　　在小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞系BV2細(xì)胞培養(yǎng)，觀察小膠質(zhì)細(xì)胞激活劑LPS處理BV2細(xì)胞后前炎癥細(xì)胞因子和氧化應(yīng)激產(chǎn)物改變；進(jìn)一步檢測LPS誘導(dǎo)的BV2細(xì)胞CysLT1R，CysLT2R和ERK信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)變化；在上述實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，評價(jià)CysLT1R拮抗劑montelukast，CysLT2R拮抗劑HAMI3379和ERK1/2抑制劑U012

3、6對LPS誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥和氧化應(yīng)激的作用。
　　結(jié)果：
　　第一部分 CysLTR介導(dǎo)LPS誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥和氧化應(yīng)激
　　為闡明CysLT1R和CysLT2R是否參與小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥和氧化應(yīng)激反應(yīng)，我們在BV2細(xì)胞培養(yǎng)觀察了LPS誘導(dǎo)的改變。研究發(fā)現(xiàn)，LPS誘導(dǎo)BV2細(xì)胞前炎癥細(xì)胞因子TNF-α和氧化應(yīng)激產(chǎn)物iNOS、 NO以及ROS增加。LPS也濃度依賴性的誘導(dǎo)BV2小膠質(zhì)細(xì)胞CysLT1R和CysLT2R

4、表達(dá)上調(diào)。CysLT1R受體拮抗劑montelukast和CysLT2R選擇性拮抗劑HAMI3379有效抑制LPS誘導(dǎo)的BV2細(xì)胞前炎癥細(xì)胞因子和氧化應(yīng)激產(chǎn)物。這些結(jié)果提示CysLTR在LPS誘導(dǎo)BV2小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥和氧化應(yīng)激反應(yīng)中起關(guān)鍵作用。
　　第二部分 ERK1/2信號通路參與CysLTR介導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥和氧化應(yīng)激
　　為初步探討 CysLTR參與 PD小膠質(zhì)細(xì)胞激活的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，在 LPS誘導(dǎo)的BV2細(xì)胞模型，我們

5、觀察了ERK1/2信號通路相關(guān)蛋白P-ERK和EGR-1的表達(dá)改變以及CysLT1R，CysLT2R拮抗劑和ERK1/2抑制劑的作用。研究表明，LPS誘導(dǎo)P-ERK和即早蛋白EGR-1表達(dá)上調(diào)。ERK1/2抑制劑U0126抑制LPS增加的P-ERK和EGR-1表達(dá)，減少LPS誘導(dǎo)的小膠質(zhì)TNF-α、iNOS、 NO和ROS產(chǎn)物。CysLT1R拮抗劑montelukast和CysLT2R拮抗劑HAMI3379也抑制LPS誘導(dǎo)的P-ERK和

6、EGR-1表達(dá)上調(diào)。結(jié)果提示ERK1/2信號通路參與CysLTR介導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥和氧化應(yīng)激反應(yīng)。
　　結(jié)論：
　　1.在BV2小膠質(zhì)細(xì)胞，CysLT1R和CysLT2R介導(dǎo)LPS誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥和氧化應(yīng)激，小膠質(zhì)細(xì)胞因子TNF-α和氧化應(yīng)激產(chǎn)物iNOS、 NO和ROS增加。LPS誘導(dǎo)ERK1/2磷酸化和EGR-1表達(dá)增加。
　　2. CysLT1R拮抗劑montelukast，CysLT2R拮抗劑HAMI337