板藍(lán)根多糖對(duì)大鼠肝臟缺血-再灌注損傷的保護(hù)作用.pdf

1、1、目的
　　 通過(guò)構(gòu)建大鼠自體原位肝移植(AOLT)模型，比較板藍(lán)根多糖灌胃組大鼠與對(duì)照組大鼠自體原位肝移植術(shù)后早期肝臟病理改變、生化指標(biāo)及TNF-α表達(dá)差異，研究板藍(lán)根多糖對(duì)大鼠自體原位肝移植模型肝臟缺血-再灌注損傷的保護(hù)作用，分析其對(duì)肝移植大鼠肝臟功能保護(hù)作用的可能機(jī)制，為進(jìn)一步探索肝移植提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 2、方法
　　 2.1清潔級(jí)SD純系大鼠72只，雌雄不拘，隨機(jī)分為3組：自體原位肝移植模型組(AO

2、LT組n=24)；板藍(lán)根多糖+自體原位肝移植組(RIPT組n=24)；假手術(shù)組(Sham組n=24)。兩組自體原位肝移植大鼠均采用經(jīng)門靜脈灌注的70％自體肝移植模型，并加以技術(shù)改進(jìn)施行大鼠自體原位肝移植手術(shù)，Sham組行開(kāi)關(guān)腹及解剖肝周韌帶及血管手術(shù)，但術(shù)中不行灌肝處理。
　　 2.2比較大鼠自體原位肝移植術(shù)后48h內(nèi)的相關(guān)指標(biāo)變化水平。各組大鼠均在術(shù)后1h、12h、24h及48h時(shí)間段各分別處死6只，經(jīng)下腔靜脈采血、分離血清，

3、全自動(dòng)生化儀檢測(cè)ALT、AST等生化指標(biāo)，ELISA法檢測(cè)血清TNF-α，切取肝中葉作為標(biāo)本制備切片，在光鏡、透射電鏡下觀察肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)形態(tài)學(xué)改變、肝細(xì)胞線粒體及細(xì)胞器的損傷情況。
　　 3、結(jié)果
　　 3.1手術(shù)結(jié)束后，大鼠即刻蘇醒，翻身，并能維持有效呼吸、心跳。經(jīng)門靜脈灌注，肝臟熱缺血時(shí)間一般小于5秒，可以忽略。無(wú)肝期結(jié)束后，RIPT組肝臟復(fù)色均勻，色澤紅潤(rùn)；AOLT組較RIPT組復(fù)色稍差，局部可見(jiàn)花斑樣改變。

4、　　 3.2分析各組肝功能測(cè)定結(jié)果，AOLT組及RIPT組術(shù)后1h血清ALT和AST即明顯升高，于術(shù)后1h、12h及24h均顯著高于Sham組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0。05)；RIPT組隨著術(shù)后時(shí)間的延長(zhǎng)血清ALT和AST逐步回落，RIPT組血清ALT和AST在12h及24h時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)值顯著低于對(duì)應(yīng)時(shí)間段AOLT組檢測(cè)值，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 3.3光鏡下術(shù)后各組肝細(xì)胞的病理變化：RIPT組及AOLT組，

5、在術(shù)后1h觀察見(jiàn)肝細(xì)胞腫脹明顯，肝小葉結(jié)構(gòu)基本正常，其中AOLT組肝細(xì)胞之間的間隙變寬，肝血竇變窄較明顯，內(nèi)有淤積的紅細(xì)胞并見(jiàn)血栓形成，周圍出現(xiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；Sham組肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常，無(wú)炎癥細(xì)胞浸，肝組織無(wú)明顯改變。術(shù)后12h，RIPI組干細(xì)胞腫脹略重，肝組織無(wú)明顯改變；AOLT組肝細(xì)胞水腫加劇，肝血竇明顯變窄，肝小葉結(jié)構(gòu)不清，內(nèi)有淤積的紅細(xì)胞和血栓，周圍有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。術(shù)后24h，RIPT組肝細(xì)胞腫脹稍好轉(zhuǎn)，肝血竇變寬；AOLT組，肝

6、細(xì)胞腫脹進(jìn)一步加重，肝血竇繼續(xù)變窄，肝小葉結(jié)構(gòu)顯示不清。
　　 3.4觀察透射電子顯微鏡下各組肝細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)可見(jiàn)：術(shù)后1h，RIPT組大鼠肝臟線粒體腫脹較輕，橢圓形，周圍內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)尚存；AOLT組，線粒體大小不一，明顯腫脹，呈類圓形。術(shù)后12h，RIPT組大鼠肝臟線粒體腫脹略加重，內(nèi)嵴部分?jǐn)嗔眩杂猩倭颗帕?，周圍?nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)尚存；AOLT組線粒體腫脹加劇，嚴(yán)重者可見(jiàn)線粒體嵴減少、斷裂或消失，周圍內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)破壞。術(shù)后24h，RIP

7、T組大鼠肝臟線粒體腫脹略好轉(zhuǎn)，損傷未見(jiàn)加劇，周圍內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)尚存；AOLT組線粒體腫脹加劇，內(nèi)有空泡樣變性，可見(jiàn)嵴斷裂或消失嚴(yán)重。術(shù)后48小時(shí)，RIPT組大鼠肝臟細(xì)胞基本正常，見(jiàn)少量核碎裂相；AOLT組見(jiàn)較多量核碎裂、凝固及溶解，可及凋亡小體。
　　 3.5 AOLT組及RIPT組血清TNF-α于術(shù)后1h均明顯升高，顯著高于Sham組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。RIPT組血清TNF-α各時(shí)間段始終低于AOLT組，于術(shù)后1、

8、12、24小時(shí)兩者檢測(cè)值差異顯著，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 4、結(jié)論
　　 本實(shí)驗(yàn)采用自體原位肝移植模型，經(jīng)門靜脈灌肝，很好的模擬了臨床上肝臟缺血-再灌注損傷的病理生理過(guò)程，避免了免疫損傷的干擾，減少了因下游臟器的缺血-再灌注損傷而受到的影響，能夠相對(duì)獨(dú)立的反映肝臟的缺血-再灌注損傷；板藍(lán)根多糖灌胃預(yù)處理，能夠減輕自體原位肝移植模型大鼠肝臟的缺血-再灌注損傷，其可能的機(jī)制是通過(guò)調(diào)節(jié)缺血-再灌注損傷過(guò)程中單