地塞米松對早產(chǎn)鼠腦白質(zhì)發(fā)育及新生鼠腦損傷的影響及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的：缺氧缺血性腦病(Hypoxic ischemicencephoiopathy，HIE)是新生兒，尤其是早產(chǎn)兒窒息后的嚴(yán)重并發(fā)癥，病情重，預(yù)后差，并可引起永久性神經(jīng)功能障礙。隨著早產(chǎn)兒存活率的不斷提高，腦損傷已成為影響早產(chǎn)兒預(yù)后及生長發(fā)育的重要因素，其治療僅停留于對癥及支持治療。腦損傷的病因是多因素的，包括感染、缺氧缺血、炎性細(xì)胞因子等，其中過度釋放的炎性細(xì)胞因子可激活炎癥級聯(lián)反應(yīng)從而引起鈣超載和神經(jīng)細(xì)胞死亡。白介素一1B(Inte

2、deulin-1β IL-1β)是缺氧缺血中重要的細(xì)胞因子，缺氧缺血導(dǎo)致胎兒血液循環(huán)及中樞神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生IL-1β和TNF-a，進(jìn)而直接刺激少突膠質(zhì)細(xì)胞(Oligodendrocyte，OL)影響髓鞘形成，導(dǎo)致腦白質(zhì)損傷(White matterdamage，WMD)。髓鞘堿性蛋白(Myelin basic proteinMBP)是近年來發(fā)現(xiàn)的中樞神經(jīng)髓鞘的主要蛋白質(zhì)，主要分布于腦白質(zhì)區(qū)。髓鞘破壞時(shí)，MBP可釋放入腦脊液和血中。研究證明腦

3、脊液、血液MBP含量測定是反映中樞神經(jīng)系統(tǒng)有無實(shí)質(zhì)性損害，特別是有無髓鞘脫失的一個(gè)較為特異的生化指標(biāo)。地塞米松(Dexalnethasone Dex)是目前常用的促進(jìn)胎兒肺成熟的藥物，其在腦損傷發(fā)生、發(fā)展及修復(fù)中的作用備受國內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注。既往研究證實(shí)，對于成年動(dòng)物，Dex可以加劇缺血所引起的細(xì)胞外液中谷氨酸堆積的程度及細(xì)胞內(nèi)Ca<'2+>超載，從而加重缺氧缺血性腦損傷(Hvpoxic ischemic brain damage，HIB

4、D)；亦有研究發(fā)現(xiàn)Dex能減輕新生動(dòng)物HIBD，且具有一定的時(shí)效與量效關(guān)系<'[1]>。因此開展不同劑量、不同時(shí)期應(yīng)用Dex對發(fā)育中的腦以及損傷腦組織影響的研究，對于改善腦損傷的預(yù)后，提高患兒的生存質(zhì)量具有重要意義。本實(shí)驗(yàn)通過建立單側(cè)HIBD及早產(chǎn)動(dòng)物模型，觀察損傷側(cè)腦組織形態(tài)學(xué)改變、凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)、IL-lβ及MBP的含量和大鼠缺血缺氧時(shí)表現(xiàn)及行為能力的變化，研究、探討Dex對HIBD的影響和可能機(jī).制。 方法：(1)早產(chǎn)鼠模型

5、制作：選擇SD孕鼠18只隨機(jī)分為Dex大劑量組(H-Dex P group) 、Dex小劑量組(L-Dex P group)、生理鹽水對照組(P NS group)，每組6只，①H-Dex P group、L-Dex P group，于雌鼠孕16、17、18天連續(xù)3天分別腹腔注射Dex0.5mg/kg.d、0.1mg/kg·d；②P NS group同時(shí)刻給予腹腔注射等體積生理鹽水。3組雌鼠均于孕19天剖宮產(chǎn)取出胎鼠，從每組早產(chǎn)鼠中隨機(jī)

6、選擇8只，作為研究對象。(2)mBD模型制作：選擇健康4日齡SD大鼠100只，按實(shí)驗(yàn)要求及觀察時(shí)段隨機(jī)分成小劑量Dex預(yù)處理組(0.1mg/kg·d， L-Dexl group)、大劑量Dex預(yù)處理組(0.5mg/kg·d， H-Dexl group)、小劑量Dex治療組(0.1mg/kg·d，L-Dex2 group)、大劑量Dex治療組(0.5mg/kg·d，H-Dex2 group)及生理鹽水對照組(NS group)；每組20只

7、，①Dex預(yù)處理組于生后第4天起連續(xù)3天腹腔注射Dex，于生后7天制成mBD模型。②DeX治療組于HIBD后當(dāng)天起連續(xù)3天腹腔注射Dex；③ NS group在HIBD后當(dāng)天(生后第7天)連續(xù)3天腹腔注射等體積NS。各組于HIBD后3天、7天分別處死。(3)正常對照組(Normal group)：選擇健康7日齡SD大鼠20只，不予任何處理，于生后第10天、第14天分別處死。(4)標(biāo)本采集、檢測方法：無菌條件下，早產(chǎn)各組剖腹取出

8、后立即留取腦標(biāo)本，HIBD各組及Normal group處死后立即取血、腦標(biāo)本，觀察腦含水量、腦形態(tài)學(xué)改變、采用EUSA及流式細(xì)胞術(shù)檢測血清及腦組織MBP、IL-1β、腦組織凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)。所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS-12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用Q檢驗(yàn)、單因素方差分析，P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 1 腦含水量：①NS group較Nomal group腦含水量明顯增加，差異有顯著性(P<0.01)；Dexl gr

9、oup及Dex2group較NS group均減少，差異有顯著性(P<0.05)；且呈劑量依賴性。Dexl group和Dex2 group等劑量間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。②P NS group較H-Dex P group、L-Dex Pgroup增加，差異有顯著性(P<0.05)；H-Dex P group和L-Dex P group比較，差異無顯著性(P>0.05)。 2 腦形態(tài)學(xué)改變：光鏡下，NS group腦組織

10、切片3天組、7天組與同時(shí)Dexl group、Dex2 group比較，可見Dexl group、Dex2 group病變改善均較明顯。 3 腦細(xì)胞凋亡計(jì)數(shù)：NS group較Nomal group凋亡計(jì)數(shù)明顯增加，差異有顯著性(P<0.01)；Dexl group及Dex2 group均較NS group凋亡計(jì)數(shù)明顯減少，差異有顯著性(P<0.01)；且呈劑量依賴性；等劑量Dexl group較Dex2 group凋亡計(jì)數(shù)減

11、少，差異有顯著性(P<0.05)。H-Dex P group、L-Dex P group較P NS group增加，差異有顯著性(P<0.05)；且呈劑量依賴性。 4 HIBD組血清及腦組織MBP、IL-lβ含量的測定：NSgroup血清及腦組織MBP含量較N0rmal group明顯增加(P<0.01)，IL-lβB含量較Normal group明顯增加(P<0.05)，差異有顯著性；Dexl group、Dex2 grou

12、p血清及腦組織MBP含量較同時(shí)刻N(yùn)S group明顯減少(P<0.01)，IL-lβ含量較同時(shí)刻N(yùn)S group明顯減少(P<0.01)差異有顯著性，且呈劑量依賴性；同劑量Dexlgroup與Dex2 group比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 5 早產(chǎn)組腦組織MBP、IL-lβ含量的測定：H-Dex Pgroup、L-Dex P group腦組織MBP含量較P NS group明顯增加，差異有顯著性(P<0.05)；IL-

13、lβ含量較P NS group明顯減少，差異有顯著性(P<0.05)；大劑量組和小劑量組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 結(jié)論 1 預(yù)防性應(yīng)用Dex對早產(chǎn)鼠作用表現(xiàn)為大腦皮層膠膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)一步成熟，MBP含量明顯增加、IL-lβ含量明顯減少，而凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯增加，且該作用具有劑量依賴性，提示Dex可能具有促進(jìn)腦白質(zhì)發(fā)育及髓鞘形成，促進(jìn)腦成熟的作用；同時(shí)可能對胎腦的正常發(fā)育有負(fù)面影響，提示早產(chǎn)兒應(yīng)慎用Dex治療，并傾向

14、于使用小劑量。 2 預(yù)防性應(yīng)用Dex對HIBD的作用表現(xiàn)為MBP、IL-lβ含量下降，凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯減少，明顯減輕腦水腫，且該作用均存在劑量依賴性，提示預(yù)防性應(yīng)用Dex對HIBD具有一定的保護(hù)作用。 3 大鼠HIBD后治療性應(yīng)用Dex與預(yù)防性應(yīng)用作用相比，除抑制細(xì)胞凋亡的作用稍遜外，兩者無顯著區(qū)別。 4 Dex對腦損傷的保護(hù)作用可能是通過抑制IL-lβ的過度表達(dá)，進(jìn)而抑制炎性介質(zhì)的產(chǎn)生，減輕炎癥級聯(lián)反應(yīng)從