化瘀解毒中藥對(duì)宮內(nèi)感染致早產(chǎn)腦損傷仔鼠腦TNF-a對(duì)GFAP表達(dá)的影響.pdf

1、目的：觀察化瘀解毒中藥對(duì)宮內(nèi)感染致早產(chǎn)腦損傷仔鼠腦組織中腫瘤壞死因子(TNF-α)和膠質(zhì)纖維酸性蛋白GFAP表達(dá)影響，探討化瘀解毒法改善宮內(nèi)感染致早產(chǎn)腦損傷的機(jī)制，提出宮內(nèi)感染所致腦癱的中醫(yī)藥治療可以從毒、瘀論治的新理論。
　　 方法：(1)動(dòng)物模型制各：12只孕第16天的脂多糖(LPS)組大鼠予LPS450μg/kg d，連續(xù)兩天腹腔注射，8只生理鹽水組孕鼠腹腔注射同劑量的生理鹽水。孕22天前分娩的仔鼠為早產(chǎn)仔鼠。記錄兩組孕鼠

2、的分娩時(shí)間及新生仔鼠的出生體重。仔鼠出生后即刻隨機(jī)選LPS組和對(duì)照組孕鼠各2只取子宮和胎盤HE染色觀察宮內(nèi)感染情況，判斷標(biāo)準(zhǔn)為大量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。隨機(jī)選LPS組和對(duì)照組仔鼠各8只斷頭取腦HE染色，觀察腦室旁白質(zhì)損傷情況。(2)隨機(jī)選取生理鹽水組足月產(chǎn)仔鼠8只作為空白對(duì)照組(A)和LPS組早產(chǎn)仔鼠24只。LPS組仔鼠隨機(jī)分為3組，每組8只，分別為：血必凈高劑量組(B)，血必凈低劑量組(C)，模型組(D)。四組大鼠恒溫恒濕，母乳喂養(yǎng)，7日齡

3、時(shí)B組予血必凈注射液8ml/kg·d腹腔注射，C組4ml/kg·d腹腔注射，A組與D組予生理鹽水4ml/kg·d腹腔注射，共14天。(3)21日齡時(shí)對(duì)四組大鼠進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)檢測(cè)(采用懸吊試驗(yàn))，并取腦組織應(yīng)用免疫組化方法對(duì)OFAP、TNF-α進(jìn)行測(cè)定。
　　 結(jié)果：(1)LPS組中8只孕鼠提前分娩，1只孕鼠分娩前死亡，共娩出早產(chǎn)仔鼠45只，死產(chǎn)仔鼠17只，余3只足月順利生產(chǎn)，共娩出足月仔鼠23只，無死產(chǎn)仔鼠：對(duì)照組孕鼠均足月順利

4、生產(chǎn)，孕鼠無提前分娩及死亡，共娩出活產(chǎn)足月仔鼠65只；與對(duì)照組仔鼠相比，LPS組仔鼠出生時(shí)皮膚顏色紫紺、體重低、活動(dòng)少；LPS組子宮及胎盤病理HE染色見大量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，說明模型組孕鼠存在宮內(nèi)感染；LPS組仔鼠腦組織白質(zhì)結(jié)構(gòu)稀疏，膠質(zhì)細(xì)胞聚集，可見出血改變。(2)模型組仔鼠反應(yīng)遲鈍、穩(wěn)定性差，懸吊時(shí)肢體自主活動(dòng)明顯減少，下肢易顫抖，掉落到桌上;空白對(duì)照組大鼠反應(yīng)快，動(dòng)作靈活、準(zhǔn)確，在玻璃棒上可自由運(yùn)動(dòng)，甚至可翻上玻璃棒并且沿玻璃棒爬行

5、，與模型組比較差異有極顯著意義(P<0.01)；血必凈高組和低組干預(yù)治療后行為改善情況介于模型組與空白對(duì)照組之間(P<0.05)，說明血必凈高、低劑量組可使宮內(nèi)感染致早產(chǎn)腦損傷仔鼠在行為學(xué)方面得到改善。血必凈高、低劑量干預(yù)治療的兩組之間差異無顯著意義(P>0.05)，說明血必凈高、低劑量干預(yù)治療改善仔鼠行為學(xué)方面作用相當(dāng)。(3)化瘀解毒中藥干預(yù)治療后使宮內(nèi)感染致早產(chǎn)腦損傷仔鼠腦組織中TNF—α表達(dá)減少而GFAP陽性表達(dá)增加。TNF-α結(jié)

6、果：①模型組腦室旁白質(zhì)TNF-α含量最高，空白對(duì)照組腦室旁白質(zhì)TNF-α含量最低，兩組相比差異有極顯著意義(P<0.01)；血必凈高、低劑量組腦室旁白質(zhì)中TNF-α含量近似，介于模型組和空白組之間(P<0.05)，說明血必凈高、低劑量組可使對(duì)腦白質(zhì)具有毒性的TNF-α含量下降，防止其對(duì)腦白質(zhì)的進(jìn)一步損害，提示干預(yù)治療有效。②血必凈高劑量組與低劑量組相比，腦室旁白質(zhì)中TNF-α含量差異無顯著意義(P>0.05)，說明血必凈高、低劑量干預(yù)治

7、療的療效基本一致。GFAP結(jié)果：①血必凈高劑量組、低劑量組腦室旁白質(zhì)中GFAP陽性細(xì)胞數(shù)目相近且同屬最高，與空白對(duì)照組相比P<0.01，與模型組相比P<0.05，說明血必凈干預(yù)治療可使具有保護(hù)和修復(fù)作用的GFAP陽性細(xì)胞數(shù)明顯增高，改善宮內(nèi)感染所致的早產(chǎn)腦損傷，干預(yù)治療有效。模型組介于血必凈高低劑量組和空白組之間(P<0.05)，說明宮內(nèi)感染致早產(chǎn)仔鼠腦損傷后，腦室旁白質(zhì)中GFAP表達(dá)反應(yīng)增加。②血必凈高劑量組腦室旁白質(zhì)中GFAP陽性細(xì)

8、胞均數(shù)高于低劑量組，說明血必凈高劑量組療效優(yōu)于低劑量組，但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異無顯著意義(P>0.05)，可能與樣本量小有關(guān)。
　　 結(jié)論：(1)通過復(fù)制黑龍江佳木斯大學(xué)宮內(nèi)感染動(dòng)物模型，證實(shí)脂多糖(LPS)可以造成宮內(nèi)感染引起仔鼠腦損傷，模型真實(shí)可靠。(2)化瘀解毒中藥對(duì)宮內(nèi)感染致早產(chǎn)腦損傷仔鼠腦組織中TNF—α和GFAP表達(dá)有調(diào)節(jié)作用，可明顯改善宮內(nèi)感染致早產(chǎn)腦損傷，其機(jī)制可能與降低腦組織中TNF—α和使GFAP表達(dá)升高有關(guān)。(