HO-CO系統(tǒng)和NOS-NO系統(tǒng)在RE患者食管粘膜中的表達.pdf

1、目的：反流性食管炎(RE)是一種常見的消化系統(tǒng)的疾病，其病因尚未完全明了，最新的研究顯示一些氣體信使分子可能與RE的發(fā)病機制有關(guān)，本研究測定了RE患者食管下括約肌的靜息壓力、血漿一氧化氮(NO)和一氧化碳(CO)濃度、HO/CO系統(tǒng)和NOS/NO系統(tǒng)在RE患者食管粘膜中的表達，旨在研究它們之間的關(guān)系，為探討RE的發(fā)病機制做出一些嘗試。 方法： (1)RE的診斷按照洛杉磯分類標準(世界胃腸病學大會，1994年)：共分4級：A級：粘

2、膜破損局限于粘膜皺襞上，且長度<5mm；B級：粘膜破損局限于粘膜皺襞上，其中至少一個粘膜破損長度>5mm；C級：粘膜破損相互融合，但小于食管周徑75％；D級：粘膜破損相互融合，至少侵犯食管周徑75％以上，食管下端潰瘍也列入D級。從行胃鏡檢查的病例中選擇了77例RE患者及20例對照組。(2)應用高分辨臺式灌注導管測壓儀測定了各組RE患者和對照組食管下括約肌的靜息壓壓力。(3)采用硝酸還原酶法測定各組RE患者和對照組血漿中NO的濃度。(4)

3、采用比色法測定各組RE患者和對照組血漿中CO的濃度。(5)采用免疫組織化學(SP)染色法觀察血紅素氧合酶-1(HO-1)、血紅素氧合酶-2(HO-2)、誘導型一氧化氮合酶(iNOS)、神經(jīng)元型一氧化氮合酶(nNOS)在RE患者及對照組的食管粘膜中的定位；并用圖像分析技術(shù)半定量監(jiān)測其蛋白的表達的強弱，用平均光密度值表示強弱。(6)采用SPSS 11.0統(tǒng)計軟件分析處理，計量資料以均值±標準差(x±s)來表示，計數(shù)資料采用x<'2>檢驗，各

4、組均數(shù)的比較用單因素方差分析，兩兩之間均數(shù)比較用LSD-t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義，對iNOS和HO-1表達水平采用相關(guān)性分析，若P<0.05表明兩者具有相關(guān)性。 結(jié)果：(1)食管下括約肌靜息壓力(mmHg)的測定：RE各組和對照組分別為：A級組：10.77±2.53；B級組：9.60±1.95；C級組：6.98±1.77；D級組：5.60±1.51；對照組：17.88±8.33。統(tǒng)計學分析顯示：A、B組之間和C、D

5、組之間比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，其它各組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。(2)NOS/NO系統(tǒng)的測定：①血漿一氧化氮(μmol/L)濃度的測定值分別為：A級組：58.22±21.69；B級組：62.40±24.07；C級組：73.74±37.30；D級組：94.51±36.19；對照組：49.24±18.57。統(tǒng)計學分析顯示：除A級組與B級組、A級組與C級組、A級組與對照組、B級組與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0

6、.05)，其它各組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。②免疫組化染色結(jié)果顯示：iNOS蛋白主要在RE患者食管粘膜上皮細胞中表達，胞質(zhì)呈黃色至棕黃顆粒，iNOS在細胞核中也有少量表達。對照組，大多樣本沒有iNOS陽性細胞的表達，少數(shù)樣本在食管粘膜上皮細胞中表達，胞質(zhì)呈淺黃色；nNOS蛋白主要在食管粘膜上皮細胞中表達，胞質(zhì)呈黃色至棕黃顆粒。對照組，大多樣本沒有nNOS陽性細胞的表達，少數(shù)樣本在食管粘膜上皮細胞中表達，胞質(zhì)呈淺黃色。③平均

7、光密度值：iNOS平均光密度值分別為：A級組：0.212±0.021；B級組：0.212±0.023；C級組：0.285±0.022；D級組：0.333±0.029；對照組：0.162±0.017。統(tǒng)計學分析顯示：除A級組與B級組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，其它各組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；nNOS平均光密度值分別為：A級組：0.200±0.028；B級組0.205±0.036；C級組：0.214±0.039；D

8、級組：0.217±0.063；對照組：0.175±0.013。統(tǒng)計學分析顯示：A、B、C、D組之間的比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，但與對照組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。(3)HO/CO系統(tǒng)的測定：①血漿一氧化碳濃度(μmol/L)的測定：A級組：0.787±0.262； B級組：0.879±0.261；C級組：0.759±0.204；D級組：0.810±0.287：對照組：0.858±0.235。統(tǒng)計學分析顯示：RE

9、各組與對照組比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。②免疫組化染色結(jié)果顯示： HO-1蛋白主要在RE組食管粘膜上皮細胞中表達，胞質(zhì)呈黃色至棕黃顆粒。對照組，大多樣本沒有HO-1陽性細胞的表達，少數(shù)樣本在食管粘膜上皮細胞中表達，胞質(zhì)呈淺黃色；HO-2蛋白在RE患者和對照組食管粘膜上皮細胞中均有表達，胞質(zhì)呈黃色至棕黃顆粒。③平均光密度值：HO-1平均光密度分別為：A級組：0.209±0.031；B級組：0.210±0.032；C級組：0.2

10、38±0.032；D級組：0.312±0.050；對照組：0.176±0.016。統(tǒng)計學分析顯示：除A級組與B級組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，其它各組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)：HO-2平均光密度分別為：A級組：0.243±0.053；B級組：0.218±0.043；C級組：0.225±0.042；D級組：0.217±0.041；對照組：0.218±0.037。統(tǒng)計學分析顯示：A組、B組、C組、D組之間的比較差異無

11、統(tǒng)計學意義(P>0.05)，且與對照組比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。(4)NOS/NO系統(tǒng)與HO/CO系統(tǒng)之間的關(guān)系：RE患者HO-1和iNOS的表達呈正相關(guān)(r=0.513，P=0.000)；而對照組HO-1和iNOS的表達無相關(guān)性(r=0.073，P=0.758)。 結(jié)論：1．RE各組食管下括約肌靜息壓均低于對照組，提示RE患者可能存在食管下括約肌靜息壓的降低。2．隨著反流性食管炎程度的加重，RE患者血漿NO濃度有

12、逐漸增高的趨勢，提示NO介導了LES運動調(diào)節(jié)并參與了RE的致病過程；iNOS蛋白主要在RE患者食管粘膜上皮細胞中表達，在細胞核中也有少量表達；對照組則極少見iNOS陽性細胞的表達。RE患者iNOS表達較對照組增強，同時隨著食管病變程度的加重而進行性增強，提示iNOS的高表達可能是導致食管粘膜損傷的重要因素：nNOS蛋白主要RE患者食管粘膜上皮細胞中表達，而對照組則極少見nNOS陽性細胞的表達。這提示RE患者食管nNOS的分布和表達異?？?/p>

13、能引起食管組織內(nèi)、細胞內(nèi)和細胞間NO分布及量的改變，從而導致食管粘膜的損傷。3．RE各組血漿一氧化碳濃度與對照組無差異，考慮與測定血漿中一氧化碳的影響因素較多有關(guān)；HO-1蛋白主要在RE組食管粘膜上皮細胞中表達，而對照組則極少見HO-1陽性細胞的表達，隨著反流性食管炎的程度的加重，HO-1陽性細胞及其蛋白的表達也一致性地增強，從而發(fā)揮自身保護效應，推測HO-1在食管損傷發(fā)生時作為一種代償性機制具有一定保護作用；HO-2蛋白在RE組和對照