利用單個核細胞培養(yǎng)擴增臍血NK細胞的體系探索.pdf

1、本研究在于探尋一種利用單個核細胞為初始接種細胞，獲得高純度和高活性自然殺傷(NK)細胞的新方法，為NK細胞免疫治療奠定實驗基礎(chǔ)。收集3份健康足月孕婦的臍帶血，密度梯度分離單個核細胞(MNCs)，每份細胞樣本分別接種于經(jīng)抗人CD16mAb，CD3mAb和CD16mAb+CD3mAb鋪板的培養(yǎng)瓶中。使用含自體血漿、重組人IL-2，IL-15和IL-21的無血清培養(yǎng)基，在相同條件下培養(yǎng)擴增14d。計算擴增倍數(shù)，并利用流式細胞術(shù)測定CD56+C

2、D3-細胞的比例。以白血病細胞系K562細胞為靶細胞，利用MTT實驗測定所培養(yǎng)NK細胞在不同效靶比條件下的殺傷率。結(jié)果表明，培養(yǎng)14d后，CD16mAb，CD3mAb和CD16mAb+CD3mAb組細胞總數(shù)分別擴增45.71±5.54、87.41±19.77和51.84±4.88倍，CD3mAb組顯著高于其它2組(P＜0.05)。培養(yǎng)前CD56+CD3-細胞比例為0.1663±0.0201，經(jīng)培養(yǎng)擴增14d后CD16mAb，CD3mAb

3、和CD16mAb+CD3mAb組CD56+CD3-細胞比例分別為0.8167±0.0500、0.8077±0.0589和0.8077±0.0273，3組無顯著差別。培養(yǎng)14d后，MTT殺傷實驗顯示，效靶比為1∶1、5∶1和10∶1時，3組殺傷效率均無顯著差別(P＞0.05)。結(jié)果提示，使用抗CD3mAb及IL-2，IL-15和IL-21培養(yǎng)單個核細胞，可獲得高純度和高殺傷活性的NK細胞。本研究為NK細胞的體外純化擴增提供了一個簡單有效的