細(xì)胞轉(zhuǎn)化系統(tǒng)檢測(cè)環(huán)境致癌物的應(yīng)用研究.pdf

1、人類日常生活環(huán)境中存在著大量的化學(xué)和生物性致癌因子，這些致癌因子之間往往存在著多種形式的相互作用。腫瘤的發(fā)生是一種宿主與環(huán)境之間復(fù)雜的、動(dòng)態(tài)的相互作用過程，由于人類接觸致癌物有顯著的時(shí)間差異，所以體外實(shí)驗(yàn)研究就成為可疑物質(zhì)致癌作用的有效評(píng)價(jià)方式。細(xì)胞轉(zhuǎn)化檢測(cè)技術(shù)是一種有效的篩查致癌物的體外檢測(cè)方法，能夠高度模擬致癌物在動(dòng)物體內(nèi)的致癌過程，比一般的體外檢測(cè)系統(tǒng)敏感，是目前體外實(shí)驗(yàn)檢測(cè)環(huán)境遺傳毒物最為可靠的方法。 本文采用細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)

2、驗(yàn)、軟瓊脂克隆實(shí)驗(yàn)以及小鼠體內(nèi)致瘤等生物學(xué)技術(shù)，針對(duì)環(huán)境中常見的致癌物——MC-LR、苯并[a]芘、1，3-硝基苯并芘以及苯并芘代謝物的致癌性進(jìn)行了深入的探討，并將該實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)應(yīng)用于淮河流域污染水源的分析，從細(xì)胞生物學(xué)角度評(píng)價(jià)了淮河流域污染水源對(duì)人體的潛在致癌性。首先通過體外細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，以轉(zhuǎn)染了5型腺病毒DNA的人胚腎永生化細(xì)胞(293細(xì)胞系)作為靶細(xì)胞詳細(xì)研究MC-LR、苯并[a]芘等的致癌作用。通過細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)篩選出MC-LR、苯并

3、[a]芘等物質(zhì)適宜進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)化的濃度實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)首先將待測(cè)物質(zhì)與細(xì)胞共同作用培養(yǎng)一段時(shí)間后，通過顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)及其生長(zhǎng)接觸抑制特性的改變，然后通過血清依賴性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)特性的變化，初步確定293細(xì)胞在致癌物的誘導(dǎo)作用下發(fā)生了惡性轉(zhuǎn)化。之后將轉(zhuǎn)化后的293細(xì)胞分別進(jìn)行軟瓊脂克隆培養(yǎng)和小鼠體內(nèi)致瘤實(shí)驗(yàn)，檢驗(yàn)其是否能在軟瓊脂中錨著獨(dú)立生長(zhǎng)形成克隆并在免疫缺陷小鼠體內(nèi)浸潤(rùn)生長(zhǎng)形成腫瘤，進(jìn)一步明確MC-LR、苯并[a]芘等對(duì)293細(xì)胞惡性

4、轉(zhuǎn)化的誘導(dǎo)作用，從而檢測(cè)其致癌性。采用小于MC-LR最小致癌劑量的濃度與TPA共同作用于293，檢測(cè)MC—LR與TPA的協(xié)同致癌作用。在對(duì)純毒素進(jìn)行研究的基礎(chǔ)上，采用體外細(xì)胞轉(zhuǎn)化系統(tǒng)對(duì)淮河流域受污染的水樣進(jìn)行檢測(cè)，從細(xì)胞生物學(xué)的角度評(píng)價(jià)污染水樣的潛在致癌性。分別于消化道腫瘤高發(fā)的河南省沈丘縣淮河支流沙穎河源頭兩個(gè)農(nóng)戶家中的井水以及蔡河魏橋采集水樣。通過過濾、色譜柱濃縮等實(shí)驗(yàn)方法得到水樣的濃縮液，采用細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)、軟瓊脂克隆實(shí)驗(yàn)以及血清依