結直腸癌相關生物標志物的臨床病理研究.pdf

1、研究目的: 研究生物標志物P16、NF-кB/P65、FHIT、DNA-PKcs、Id2、EGFR及Her-2在結直腸癌的表達與腫瘤生物學特點并探討上述標志物與患者無瘤生存時間和總體生存時間的關系。尋找新的與結直腸癌預后相關的分子標記物，以期為臨床提供更多的信息，指導治療，減少復發(fā)與轉移。 研究方法: 本實驗為回顧性研究：復習解放軍總醫(yī)院病理科1993-2006年間根治性手術切除的結直腸癌558例，根據(jù)WHO結直

2、腸癌病理分類標準，查閱相關病歷，并對1993-2002年間結直腸癌手術患者共383例全部進行隨訪，其中成功獲訪的病人共312例。將所得到的臨床資料與病理資料完整結合，最終選擇出資料完整的結直腸癌實驗標本共359例，其中有完整隨訪資料的共198例。 組織芯片的制作：在組織芯片技術原理的支持下，結合實際情況并采取重復性的探索，摸索出一個簡易可行的手工制作組織芯片的方法，并采用不銹鋼針及薄銅板自制了一個組織芯片打孔模具，將石蠟包埋的3

3、59例結直腸癌及35例癌旁正常組織標本制作成7塊組織芯片。 免疫組化染色：采用PV6000二步法，檢測7塊組織芯片中359例結直腸癌及35例癌旁正常組織標本的P16、NF-кd3/P65、FHIT、DNA-PKcs、Id2、EGFR及Her-2等七種生物標志物表達狀況，分析其與臨床、病理及預后的關系。 EGFR基因突變的檢測：提取25例結直腸癌石蠟標本的DNA，進行定量測定，并采用聚合酶鏈反應技術進行擴增反應，用擴增產(chǎn)物

4、來進行純化及測序分析，觀察其EGFR基因第18、19、20及21外顯子的突變情況。Western印跡雜交：對16例新鮮結直腸癌手術標本進行組織蛋白的提取及定量，并通過Western印跡雜交法比較結直腸癌組織與癌旁正常組織中DNA-PKcs蛋白表達的不同。結腸癌Colo205細胞的培養(yǎng)及熒光免疫細胞化學染色：采用細胞培養(yǎng)技術培養(yǎng)結腸癌Colo205細胞，通過制備Colo205細胞懸液，經(jīng)Hoechst33342和PI染色、熒光免疫細胞化學

5、染色等實驗方法，在熒光顯微鏡下觀察并計數(shù)SP細胞，分析其在P16、NF-кB/P65、FHIT、DNA-PKcs及Id2中表達的異同。 結論: 1、NF-кB/P65、腹腔及遠處轉移情況以及術后是否采取放化療等輔助治療措施是結直腸癌無瘤生存時間的獨立預后因子；NF-кB/P65、TNM分期、腹腔及遠處轉移情況以及術后是否采取放化療等輔助治療措施是結直腸癌總體生存時間的獨立預后因子。 2、生物標志物NF-кB/P6

6、5為陰性表達時，患者的無瘤生存時間較長，復發(fā)率較低。 3、DNA-PKcs、P16、NF-кB/P65、FHIT及Id2均與結直腸癌的發(fā)生發(fā)展和(或)轉移密切相關，上述生物標志物表達的變化可能對結直腸癌的演化和進展起重要作用，并可能成為新的臨床輔助診斷和監(jiān)測預后的指標。 4、DNA-PKcs、NF-кB/P65、EGFR及Id2在結直腸癌組織中的表達明顯、高于癌旁正常組織，而FHIT則相反。P16和Her-2在癌和癌旁正