結直腸癌肝轉移術前評估--microRNA標志物和臨床病理評估.pdf

1、背景：有近15-25％結直腸癌病人表現(xiàn)為同時性肝轉移，另有近50％病人在結直腸癌原發(fā)灶切除后2年出現(xiàn)異時性肝轉移。近年來，綜合治療（手術為主）使結直腸癌肝轉移的病人生存得到了顯著提高，根治切除術后5年生存率可達50％左右。雖然已有學者提出用于預測可切除結腸癌肝轉移預后的模型，但仍缺乏精準的術前評估，致使約40％的術前認為可切除的病人，因術前估計不足，施行不必要的“剖腹探查”。如何更好的術前評估結直腸癌肝轉移病人引起了廣泛重視。結直腸癌肝

2、轉移的發(fā)生除了與癌基因，抑癌基因異常表達或丟失有關，尚與“表觀遺傳學”（甲基化，乙?；蔷幋aRNA調控）密切相關。已有綜述表明，在腸癌肝轉移發(fā)生過程中廣泛涉及microRNA的調控。亦已發(fā)現(xiàn)相當數(shù)量的microRNA與此相關，已有學者稱此類microRNA為“metastamiR”。
　　目的：通過microRNA芯片高通量的分析與結直腸癌肝轉移可能相關的microRNA標志物，并通過定量PCR(qRT-PCR)驗證。對芯片發(fā)現(xiàn)

3、與結直腸癌肝轉移相關的microRNA494進行深入研究，明確microRNA494促進肝轉移發(fā)生的機制。采用meta分析明確PET-CT的應用能否在傳統(tǒng)的影像學檢查的基礎上為結腸癌肝轉移病人術前評估提供更多的價值。采用SEER數(shù)據(jù)分析淋巴結狀態(tài)對可切除轉移性結直腸癌預后的影響。
　　方法：⑴獲取31對結直腸癌“肝轉移”與“無肝轉移”的原發(fā)灶新鮮組織，提取totalRNA。采用Agilent芯片分析兩組間microRNA表達和基因

4、表達的差異。分析與結直腸肝轉移相關的microRNA譜及其調控的靶基因。⑵選取126個結直腸癌病人，結合文獻報道結果，采用石蠟標本對miR15b，miR19a，miR20a，miR181a，miR181d，miR223，miR4947個microRNA進行驗證?；仡櫡治銎渑c肝轉移發(fā)生與否關系，并進一步明確其用于預測結直腸癌預后的價值。⑶篩選出miR494低表達的Lovo細胞株。體外構建miR494過表達的miR494-Lovo細胞株，分

5、析miR494對Lovo細胞功能影響。進一步通過整合生物學分析，miR494可能作用靶點，引起肝轉移的機制。⑷從SEER數(shù)據(jù)庫里，提取了在2004-2007年期間原發(fā)灶及轉移灶均接受了手術治療的2007例轉移性結直腸癌病人的數(shù)據(jù)。采用單因素及多因素分析原發(fā)灶淋巴結轉移狀況對預后的影響。⑸共篩選了213相關的文獻，入組了13篇文獻進行meta分析。對PET用于診斷肝內和肝外轉移的準確性，改變治療率及無效手術率進行了meta分析，用于明確P

6、ET在可切除結直腸癌肝轉移的病人中應用的價值。
　　結果：芯片分析結果顯示:在結直腸癌肝轉移與無肝轉移兩個組間有16個差異表達的microRNA。其中miR15b，miR223，miR19a在肝轉移組表達下降，miR494在肝轉移表達上升，均可以進一步通過石蠟組織qRT-PCR得到驗證。并表明miR494的高表達與預后差相關。體外驗證表明miR494可引起細胞周期改變（S期比例增加），侵襲能力的增加。對于可切除轉移性結直腸癌，淋巴

7、結轉移（無論是轉移數(shù)目還是轉移率）均與預后差密切相關。對于傳統(tǒng)影像學檢查評估為的可切除的結直腸癌肝轉移的病人，加用PET可以提高肝外轉移灶的靈敏度，減少不必要的“剖腹探查”術。
　　結論：①miR15b，miR223，miR19a的低表達及miR494高表達均與腸癌肝轉移的發(fā)生有關。同時miR494高表達還與結直腸癌預后差相關。②miR494可引起Lovo細胞株侵襲能力增加，有可能成為區(qū)分可切除結直腸癌肝轉移新的標志物。③淋巴結狀