FI-CE在測(cè)定草藥活性組分中新方法的研究及應(yīng)用.pdf

1、各種分析儀器的聯(lián)用技術(shù)是目前分析化學(xué)發(fā)展的主要趨勢(shì)之一。流動(dòng)注射一毛細(xì)管電泳聯(lián)用技術(shù)正是這一發(fā)展趨勢(shì)的體現(xiàn)，該技術(shù)集中了流動(dòng)注射和毛細(xì)管電泳的優(yōu)勢(shì)。流動(dòng)注射的強(qiáng)大樣品預(yù)處理能力不僅可以拓寬毛細(xì)管電泳的應(yīng)用領(lǐng)域，而且還能從根本上解決毛細(xì)管電泳不能連續(xù)進(jìn)樣的缺點(diǎn)。然而，迄今為止，流動(dòng)注射的強(qiáng)大樣品預(yù)處理能力不僅未能在流動(dòng)注射．毛細(xì)管電泳中得到充分地應(yīng)用，而且此聯(lián)用技術(shù)在中草藥活性組分的分離測(cè)定中仍有許多理論和應(yīng)用需要深入研究。此外，濃度靈敏

2、度低仍是制約流動(dòng)注射．毛細(xì)管電泳聯(lián)用技術(shù)進(jìn)一步發(fā)展的瓶徑之一。為了充分發(fā)揮流動(dòng)注射．毛細(xì)管電泳聯(lián)用技術(shù)的優(yōu)勢(shì)和解決毛細(xì)管電泳濃度靈敏度低及由于電動(dòng)進(jìn)樣而引起的重現(xiàn)性較差的問題，本論文在綜述前人工作的基礎(chǔ)上，開展了如下具有創(chuàng)新性的研究工作： 1．利用流動(dòng)注射高的進(jìn)樣頻率，首次建立了分離測(cè)定決明子、大黃及其制劑中的四種活性蒽醌類化合物的流動(dòng)注射．毛細(xì)管區(qū)帶電泳新方法，并對(duì)樣品基體的影響進(jìn)行了詳細(xì)地探討。 2．利用流動(dòng)注射．毛

3、細(xì)管膠束電動(dòng)色譜聯(lián)用技術(shù)分離測(cè)定了不穩(wěn)定化合物山姜素和小豆蔻明(酸性或堿性條件下均互相轉(zhuǎn)化)。 3．建立了以三甲氧芐二氨嘧啶為內(nèi)標(biāo)的分離測(cè)定中草藥中粉防己堿和防己諾靈堿的流動(dòng)注射．毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜聯(lián)用技術(shù)新方法，該方法的精密度得到了顯著的提高。 4．利用電滲流引入水柱的柱頭場(chǎng)強(qiáng)放大樣品進(jìn)樣的富集手段，建立了流動(dòng)注射一毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜聯(lián)用新技術(shù)，并以防己諾靈堿和粉防己堿為模型化合物驗(yàn)證了方法的可行性。 本論文共

4、分為七章。 第一章：在對(duì)流動(dòng)注射．毛細(xì)管電泳聯(lián)用的必要性、聯(lián)用的基本原理、分流接口和裝置及應(yīng)用等方面做了詳細(xì)介紹的基礎(chǔ)上，綜述了毛細(xì)管電泳中常用的富集方法及在流動(dòng)注射與毛細(xì)管電泳聯(lián)用技術(shù)中的應(yīng)用。 第二章：采用有效長(zhǎng)度4.8 cm未涂層的石英毛細(xì)管作為分離毛細(xì)管，建立了同時(shí)測(cè)定決明子、大黃及其制劑中大黃酚、大黃素、大黃素甲醚和蘆薈大黃素的流動(dòng)注射與毛細(xì)管區(qū)帶電泳聯(lián)用新方法。樣品溶劑由100 mM NaOH和乙腈的混合溶液

5、組成(1∶1 v/v)，緩沖體系由15 mM硼砂、12.5 mM磷酸二氫鈉和42％乙腈(v/v)組成。該方法簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確度高。在最佳條件下，四種分析物可以在 6 分鐘內(nèi)獲得基線分離，進(jìn)樣頻率可達(dá)12樣/小時(shí)。大黃素甲醚、大黃酚、蘆薈大黃素和大黃素的峰面積和峰高的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為 1.62％、0.89％、2.49％、2.19％和4.45％、4.44％、4.34％、0.61％。第三章：采用內(nèi)徑 50μm，有效長(zhǎng)度10.3 cm的未涂層

6、石英毛細(xì)管作為分離毛細(xì)管，4 mM硼砂、8 mM磷酸二氫鈉、8 mM十二烷基硫酸鈉和19％(體積比)的乙醇作為緩沖溶液，建立了同時(shí)測(cè)定草豆蔻中山姜素和小豆蔻明的流動(dòng)注射．毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜聯(lián)用新方法。在最佳條件下，體系的進(jìn)樣頻率可達(dá)11-24樣/小時(shí)。山姜素和小豆蔻明的峰面積和峰高的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為 3.0％、2.5％和2.5％、3.1％，其峰面積與濃度間的相關(guān)系數(shù)(r)分別為0.9996和0.9997。該方法已用于草豆蔻中山姜素和小

7、豆蔻明的測(cè)定，回收率分別為90-92％和99-105％。 第四章：首次將場(chǎng)強(qiáng)放大樣品進(jìn)樣方式引入流動(dòng)注射-毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜聯(lián)用技術(shù)，并以防己諾靈堿和粉防己堿為模型化合物考察了影響分離和富集的條件。在最佳條件下，粉防己堿和防己諾靈堿的富集倍數(shù)可達(dá)6.8-8.9倍，峰面積和峰高的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為 3.6％、0.94％和 4.8％、4.4％，進(jìn)樣頻率可達(dá)50樣/小時(shí)。 第五章：采用內(nèi)徑50μm、有效長(zhǎng)度4.5 cm的未涂層

8、石英毛細(xì)管作為分離毛細(xì)管，建立了一種可以同時(shí)分離測(cè)定厚樸及其制劑中厚樸酚與和厚樸酚的流動(dòng)注射。毛細(xì)管區(qū)帶電泳新方法。最佳的樣品溶解條件為150 mM NaOH、最佳的緩沖溶液組成為10 mM硼砂、10mM磷酸二氫鈉，最佳的pH為12。在最佳條件下，厚樸酚與和厚樸酚的峰面積與濃度間的線性相關(guān)系數(shù)(r)分別為0.9991和 0.9998，峰面積、峰高和遷移時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為 2.0％、3.6％、2.0％和1.6％、2.0％、1.4％。

9、二者可以在5分鐘內(nèi)達(dá)到基線分離，進(jìn)樣頻率為28樣/小時(shí)。 第六章：采用三甲氧芐二氨嘧啶為內(nèi)標(biāo)，建立了分離測(cè)定粉防己堿和防己諾靈堿的流動(dòng)注射-毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜新方法。最佳的緩沖溶液組成為15 mM醋酸鈉、15 mM醋酸、3％(v/v)吐溫20和5％(v/v)的甲醇、最佳的pH為5.5。在最佳條件下，其峰面積與濃度間的線性相關(guān)系數(shù)(r)分別為0.9996和0.9991，進(jìn)樣頻率可達(dá)19-40樣/小時(shí)。該方法簡(jiǎn)單、快速、重現(xiàn)性好并已

10、用于防己及其制劑中粉防己堿和防己諾靈堿的分離測(cè)定，回收率分別為95-109％、92-106％。第七章：建立了分離測(cè)定黃連及其制劑中藥根堿、小檗堿和巴馬汀的場(chǎng)強(qiáng)放大樣品進(jìn)樣和流動(dòng)注射一毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜在線聯(lián)用的新方法。考察了緩沖溶液的離子強(qiáng)度和樣品環(huán)體積對(duì)富集效果的影響。利用流動(dòng)注射的16通自動(dòng)進(jìn)樣閥的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，通過電滲流在樣品進(jìn)入毛細(xì)管前注入一段水柱，可使樣品注入時(shí)的電場(chǎng)強(qiáng)度提高，以便更有效地堆積分析物離子。該體系緩沖溶液的組成為30