測(cè)定某些中草藥活性組分的高效毛細(xì)管電泳新方法.pdf

1、毛細(xì)管電泳(Capillary electrophoresis，CE)是80年代初建立并迅速發(fā)展起來的一種新型分離技術(shù)，具有分離效率高、分析速度快、樣品和試劑消耗少、操作簡(jiǎn)便等特點(diǎn)，已廣泛用于化學(xué)、生命科學(xué)、藥物和環(huán)境等領(lǐng)域，是當(dāng)前分析化學(xué)中發(fā)展迅速的一個(gè)學(xué)科。本學(xué)位論文圍繞毛細(xì)管電泳在分離測(cè)定中草藥活性組分中的應(yīng)用進(jìn)行了深入研究，建立了三種模型測(cè)定中草藥活性組分的新方法。 本論文第二部分充分利用了毛細(xì)管電泳中反向電壓的特點(diǎn)，研

2、究了反向電壓在不同毛細(xì)管電泳模式中的應(yīng)用，取得了以下幾方面的創(chuàng)新研究： 1.建立了分離測(cè)定綠原酸和咖啡酸的非水毛細(xì)管電泳新方法，并對(duì)山楂果實(shí)中的相應(yīng)成分進(jìn)行了分析。 2.利用反向電壓及分析物的性質(zhì)，建立了大體積進(jìn)樣.非水毛細(xì)管電泳測(cè)定綠原酸和咖啡酸的新方法，極大的改善了靈敏度。 3.利用反向電壓建立反向遷移毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜(RF-MEKC)法同時(shí)分離測(cè)定了槲皮素、蘆丁、綠原酸，并將此方法應(yīng)用于測(cè)定魚腥草和山楂果

3、實(shí)中的相應(yīng)成分。 本論文分兩大部分共四章內(nèi)容。第一部分是有關(guān)毛細(xì)管電泳理論及應(yīng)用的進(jìn)展，第二部分是研究報(bào)告： 第一部分：文獻(xiàn)綜述第一章：簡(jiǎn)單介紹了CE的原理和特點(diǎn)、CE在藥物研究中的應(yīng)用以及反向電壓在毛細(xì)管電泳中的一些應(yīng)用。 第二部分：反向電壓在毛細(xì)管電泳不同模式中的應(yīng)用以及應(yīng)用于草藥中活性成分的分離測(cè)定第二章：建立了分離測(cè)定山楂果實(shí)中活性有機(jī)酸的非水毛細(xì)管電泳新方法。該方法簡(jiǎn)單快速，分離條件為：35mM Tri

4、s-0.7％醋酸的甲醇溶液、分離電壓-25kV。在此最佳條件下，兩種分析物可在10min內(nèi)實(shí)現(xiàn)基線分離。綠原酸和咖啡酸的線性范圍均為20-200μg/ml，連續(xù)運(yùn)行5次的遷移時(shí)間和峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為：2.82％和2.29％(日內(nèi))；4.02％和3.14％(日間)。樣品中加入25、50、100μg/mL綠原酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的回收率分別為98.7％、98.2％和97.5％；加入25、50、100μg/mL咖啡酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的回收率分別為95.

5、6％、102.5％和99.4％。 第三部分：利用大體積樣品堆積法(LVSS)提高了非水毛細(xì)管電泳分析山楂果實(shí)中的活性有機(jī)酸的靈敏度。分離緩沖液為35mM Tris-0.35％醋酸的甲醇溶液，分離電壓為-25kV，重力進(jìn)樣50s。對(duì)Tris濃度、醋酸濃度、分離電壓和進(jìn)樣時(shí)間等因素對(duì)分離及富集的影響做了系統(tǒng)研究。綠原酸和咖啡酸的線性范圍均為0.625-20μg/mL，檢測(cè)限(S/N=3)分別為0.08μg/ml和0.05μg/mL。

6、該方法已用于生山楂中綠原酸和咖啡酸的含量測(cè)定，樣品中加標(biāo)回收率良好。 第四部分：應(yīng)用反向電壓建立反向遷移毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜(RF-MEKC)法同時(shí)分離測(cè)定了魚腥草和山楂果實(shí)中的槲皮素、蘆丁和綠原酸。分離條件為：70mM SDS-30mM NaH2PO4、pH2.1，分離電壓-15kV，檢測(cè)波長(zhǎng)214nm。在此最佳條件下，分析物可在15min內(nèi)實(shí)現(xiàn)基線分離。槲皮素、蘆丁和綠原酸的線性范圍及線性相關(guān)系數(shù)分別為25-400μg/mL(